發(fā)布時(shí)間：2018-12-26 12:06

【摘要】： 第一章新生大鼠腦和脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定 目的：研究新生鼠脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)和腦源性神經(jīng)干細(xì)胞在形態(tài)學(xué)及增殖能力等方面的異同，為神經(jīng)干細(xì)胞的移植應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法：從新生24小時(shí)的SD大鼠脊髓和腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)在體外進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增、傳代，去除生長(zhǎng)因子后在含血清培養(yǎng)基中誘導(dǎo)分化，在相差顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀(guān)察兩種不同來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及增殖分化方面的異同，通過(guò)免疫熒光技術(shù)鑒定神經(jīng)干細(xì)胞及其分化細(xì)胞。 結(jié)果：脊髓源性和腦源性神經(jīng)干細(xì)胞具有相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，均可自我更新和增殖。但腦來(lái)源的神經(jīng)球數(shù)量和每個(gè)神經(jīng)球所含細(xì)胞數(shù)均多于脊髓，腦源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖速度明顯更快，兩種來(lái)源的大部分原代和傳代神經(jīng)球均表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞特異性抗原Nestin陽(yáng)性，可分化為三種神經(jīng)細(xì)胞，表達(dá)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性抗原NSE、GFAP，反復(fù)傳代后這些細(xì)胞可保持自我增殖能力及多向分化潛能。 結(jié)論：1．從新生鼠的脊髓和腦組織中均可分離培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞，都具有自我更新和增殖能力，并具有多向分化潛能。 2．相同培養(yǎng)條件下，腦源性神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量多，增殖能力強(qiáng)于脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞，二者在體外都能大量擴(kuò)增。 第二章腦脊液對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響 目的：研究腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響。 方法：從新生24小時(shí)的SD大鼠腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)傳代后，分別用人的腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，模擬不同時(shí)期神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)腦脊液移植后在腦脊液中的生長(zhǎng)情況，并分為試驗(yàn)組(血性腦脊液組)和對(duì)照組(腦積水清亮腦脊液組)，分別于不同時(shí)間觀(guān)察神經(jīng)干細(xì)胞在兩組腦脊液中的生長(zhǎng)及增殖分化情況，并應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對(duì)兩組腦脊液中神經(jīng)干細(xì)胞的分化進(jìn)行鑒定和比較。 結(jié)果：神經(jīng)干細(xì)胞在兩種腦脊液中均能存活，部分細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng)，大部分細(xì)胞貼壁分化。同對(duì)照組相比，血性腦脊液組中神經(jīng)球貼壁分化的比例高，速度快，分化更徹底。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示，兩組腦脊液中分化的細(xì)胞均表達(dá)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性抗原NSE、GFAP。分化第2天試驗(yàn)組NSE陽(yáng)性細(xì)胞的比例比對(duì)照組高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；分化第10天試驗(yàn)組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞的比例比對(duì)照組高，NSE陽(yáng)性細(xì)胞的比例比對(duì)照組低，，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：1．神經(jīng)干細(xì)胞能在腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液中均能存活、增殖和分化。 2．神經(jīng)干細(xì)胞在腦外傷血性腦脊液中貼壁分化的速度比在腦積水清亮腦脊液中要快，貼壁分化比例要高。 3．腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化的種類(lèi)上有差異。神經(jīng)干細(xì)胞在腦外傷血性腦脊液中傾向于向膠質(zhì)細(xì)胞方向分化，在腦積水清亮腦脊液中傾向于向神經(jīng)元方向分化。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王念;絞股藍(lán)皂苷對(duì)脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響[D];陜西師范大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2392108