【摘要】： 交叉遞呈是外來抗原被MHC-Ⅰ類分子限制性遞呈的過程,它不同與經(jīng)典的MHC-Ⅰ類分子遞呈途徑,在經(jīng)典的MHC遞呈途徑中,內(nèi)源性表達(dá)蛋白經(jīng)蛋白酶體消化后,小部分的降解肽通過TAP進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng),在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中與新生成的MHC-Ⅰ類分子形成復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞膜,相反MHC-Ⅱ類分子的遞呈途徑則主要處理進(jìn)入內(nèi)吞系統(tǒng)的外來抗原,這樣MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ類分子分管著胞內(nèi)和胞外不同來源的抗原。 在體情況下,DC細(xì)胞是主要的交叉遞呈細(xì)胞,它通過在外周獲取感染性細(xì)胞的內(nèi)源性抗原,然后遷移到淋巴結(jié),形成的MHC-Ⅰ類分子肽復(fù)合物活化抗原特異性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞,在此過程中抗原的來源(細(xì)胞內(nèi),但是不同的細(xì)胞,或者疫苗的接種中的外來抗原)不同于經(jīng)典的MHC-Ⅰ類分子遞呈途徑(在抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)合成的抗原)。因此,在上述抗原遞呈中,抗原的降解和肽的運(yùn)送機(jī)制很可能顯著不同。近年來,由于認(rèn)識(shí)到交叉遞呈在疫苗接種中的重要作用,因此其機(jī)制研究引起了廣泛關(guān)注。 胞內(nèi)膜蛋白運(yùn)輸通常需要含有Rab蛋白的蛋白復(fù)合物,其中Rab蛋白是真核生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)事件的關(guān)鍵分子。人類基因組共含有大約70個(gè)Rab和Rab樣蛋白,它們通常位于不同的膜性結(jié)構(gòu)區(qū)域,采用鳥苷酸依賴的開關(guān)機(jī)制調(diào)節(jié)膜質(zhì)運(yùn)輸?shù)乃膫�(gè)步驟:囊泡的出芽生成,囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn),囊泡的栓縛和囊泡與靶膜結(jié)構(gòu)的融合。現(xiàn)有證據(jù)顯示有幾個(gè)蛋白位于早期的分揀和回運(yùn)囊泡(Rab4,Rab5,Rab11,Rab18,Rab22 andRab25),而Rab7和Rab9定位于晚期內(nèi)吞體,至今在樹突狀細(xì)胞的抗原遞呈中,尚無人進(jìn)行Rab分子的相關(guān)研究,因此,本文嘗試在樹突狀細(xì)胞中進(jìn)行此相關(guān)研究。 本研究希望通過轉(zhuǎn)染Rab5和Rab7突變體,在樹突狀細(xì)胞中高表達(dá)Rab5,Rab7和他們的突變體,觀察與囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的Rab分子,從而了解抗原的交叉遞呈主要發(fā)生在吞噬體成熟過程的什么階段。首先使用Rab5的抑制型突變體Rab5S34N和Rab7的抑制型突變體Rab7T22N觀察這兩個(gè)蛋白對(duì)抗原交叉遞呈的影響,結(jié)果表明Rab5S34N抑制了抗原的交叉遞呈,但Rab7T22N對(duì)抗原交叉遞呈則沒有影響。為近一步分析Rab5在此過程中的作用,我們構(gòu)建了Rab5的活化型突變體RabSQ79L,結(jié)果表明其抗原遞呈效果與Rab5野生型一致,這說明早期內(nèi)吞體是抗原交叉遞呈發(fā)生的主要場(chǎng)所,此研究結(jié)果為進(jìn)一步分析抗原交叉遞呈過程中囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn)和調(diào)節(jié)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Cross presentation is a process in which foreign antigens are restricted by MHC- class I molecules. It is different from the classical MHC- class I molecular presentation pathway. In the classical MHC presentation pathway, endogenous expressed proteins are digested by proteasome. A small portion of the degradation peptides enter the endoplasmic reticulum through TAP and form complexes with newly formed MHC- class I molecules in the endoplasmic reticulum. On the contrary, the presentation pathway of MHC- class II molecules mainly deals with the foreign antigens entering the endocytosis system. Thus, MHC- I and MHC- II molecules are responsible for different antigens from both intracellular and extracellular sources. In vivo, DC cells are the primary cross-presenting cells, which obtain the endogenous antigen of the infected cells at the peripheral level and migrate to the lymph nodes. The formation of MHC- class I peptide complexes activates antigen-specific cytotoxic T cells, during which antigen sources (within cells, but different cells), Or the foreign antigen in vaccine inoculation is different from the classical MHC- class I molecular presenting pathway (antigen presenting in the antigen presenting cell). Therefore, the mechanism of antigen degradation and peptide transport is likely to be significantly different in the above antigen presentation. In recent years, due to the recognition of the important role of cross-presentation in vaccination, its mechanism has attracted wide attention. The transport of endocytic proteins usually requires protein complexes containing Rab proteins, in which Rab proteins are key molecules of eukaryotic biofilm transport events. The human genome contains about 70 Rab and Rab like proteins, which are usually located in different membranous structural regions and regulate the four steps of membrane transport by guanosine acid dependent switching mechanism: vesicle budding and vesicle transport. The binding of vesicles and the fusion of vesicles with target membranes. Existing evidence suggests that several proteins are located in early sorting and return vesicles (Rab4,Rab5,Rab11,Rab18,Rab22 andRab25), while Rab7 and Rab9 are located in late endocysts and are now present in dendritic cells. There is no related study on Rab molecule, so we try to do this research in dendritic cells. The aim of this study was to investigate the expression of Rab5,Rab7 and their mutants in dendritic cells by transfection of Rab5 and Rab7 mutants, and to observe the Rab molecules associated with vesicular transport. Therefore, the cross-presentation of antigen occurred in the stage of phagocytic maturation. The effects of the two proteins on the cross-presentation of antigens were observed by using the inhibitory mutants Rab5S34N of Rab5 and Rab7T22N of Rab7. The results showed that Rab5S34N inhibited the cross-presentation of antigens, but Rab7T22N had no effect on cross-presentation of antigens. In order to further analyze the role of Rab5 in this process, we constructed the activated mutant RabSQ79L, of Rab5. The results showed that the antigen-presenting effect of Rab5 was the same as that of Rab5 wild type, which indicated that the early endocytosis was the main site of antigen cross-presentation. The results laid a foundation for further analysis of vesicle transport and regulation during antigen cross-presentation.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2385453