【摘要】：目的：利用力學(xué)加載裝置對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞系(D1細胞)加載不同拉伸應(yīng)變，探討力學(xué)因素對干細胞向成骨細胞分化的影響及力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。 方法：在成骨細胞誘導(dǎo)體系條件下，D1細胞施加不同的拉伸應(yīng)變后，采用免疫組化方法、RT-PCR技術(shù)、Flou-3-AM Ca~(2+)染色方法及激光共聚焦技術(shù)。分析與成骨細胞分化有關(guān)的OSX(Osterx)、骨鈣蛋白(Osteocalcin OCN)基因、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、Ⅰ型膠原(type Ⅰ collagen，COLl)、OCN蛋白的表達；對細胞內(nèi)ca~(2+)水平及微絲結(jié)構(gòu)進行考察；利用SB203580(p38MAPK特異抑制劑)、PD98059(MEK-1／2MAPK特異抑制劑)、LY294002(PI_3KS特異抑制劑)、細胞松弛素B(微絲結(jié)構(gòu)阻斷劑)、EGTA(Ca~(2+)螯合劑)信號阻斷劑探討力學(xué)信號傳導(dǎo)的信號途徑。 結(jié)果：間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化過程中，拉伸應(yīng)變能促進細胞ALP、Ⅰ型膠原、OCN蛋白的表達，，激活與成骨細胞分化起關(guān)鍵作用的OSX、OCN基因；細胞受到應(yīng)變作用時，骨架結(jié)構(gòu)微絲發(fā)生斷裂和重排，同時細胞生長方向發(fā)生相應(yīng)改變；拉伸應(yīng)變能促進干細胞內(nèi)Ca~(2+)水平的增加和鈣火花的釋放；力學(xué)信號的傳導(dǎo)與磷酸化的磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol-3-kinases，PI_3Ks)信號通路、細胞骨架結(jié)構(gòu)微絲、細胞內(nèi)Ca~(2+)水平有密切關(guān)系。 結(jié)論：不同拉伸應(yīng)變能促進間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化；力學(xué)信號通過Ca~(2+)信號、細胞微絲結(jié)構(gòu)以及PI_3Ks信號途徑引起細胞的應(yīng)答反應(yīng)和生物學(xué)效應(yīng)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of mechanical factors on the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (D1 cells) into osteoblasts and the mechanism of mechanical signal transduction. Methods: under the condition of osteoblast induction system, D1 cells were subjected to different tensile strain. Immunohistochemistry, RT-PCR, Flou-3-AM Ca~ (2) staining and laser confocal technique were used. The expression of OSX (Osterx), osteocalcin (Osteocalcin OCN) gene, alkaline phosphatase (alkaline phosphatase,ALP) and collagen 鈪

本文編號：2377185