【摘要】：Signal Transducer and Activator of Transcription 3(STAT3)受細(xì)胞因子、生長因子等的激活,在細(xì)胞生長、抗凋亡和細(xì)胞轉(zhuǎn)化上起著重要的作用。人類多數(shù)腫瘤細(xì)胞中均有高于正�；钚缘� STAT3。GRIM19(Genes associated with Retinoid-IFN-induced Mortality)是維甲酸干擾素誘導(dǎo)的死亡相關(guān)基因,它能直接特異性作用于 STAT3,抑制 STAT3 激活靶基因轉(zhuǎn)錄的活性、抑制靶基因表達(dá),從而抑制腫瘤的生長。腫瘤的靶向治療需要特異性載體,將藥物導(dǎo)向腫瘤。編碼含人類高遷移組蛋白 2(HMGN2)氮端 31 個氨基酸的 F3 肽具有特異性與腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合的功能,能將藥物帶入胞質(zhì)和胞核,可以用作腫瘤靶向給藥的載體。 本課題運用基因克隆技術(shù),從人胎盤組織中克隆了 GRIM19 的cDNA,并構(gòu)建了 F3-GRIM19 表達(dá)載體。利用大腸桿菌表達(dá)體系表達(dá) F3-GRIM19,親和層析純化獲得 F3-GRIM19 融合蛋白,并鑒定了融合蛋白體外抗腫瘤細(xì)胞增殖的生物學(xué)活性,為進(jìn)一步研究其作用機理和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 第一部分:以中國人胎盤組織為材料,提取組織總 RNA,用 RT-PCR方法擴增出 GRIM19 的 cDNA,克隆入 pET32a(+)載體中并測序鑒定,亞克隆構(gòu)建原核表達(dá)載體 pQE30-GRIM19 及 pQE30-F3-GRIM19,IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)。用 Ni2+-NTA 瓊脂糖樹脂親和層析對 GRIM19 和 F3-GRIM19 進(jìn)行純化,并透析復(fù)性。 第二部分:利用 MTT 比色法分析目的蛋白 GRIM19 和 F3-GRIM19 分別對正常 HUVEC 細(xì)胞和人乳腺癌 MCF7、MDA-MB231 細(xì)胞增殖活性的影
[Abstract]:Signal Transducer and Activator of Transcription _ 3 (STAT3), activated by cytokines and growth factors, plays an important role in cell growth, anti-apoptosis and cell transformation. STAT3.GRIM19 (Genes associated with Retinoid-IFN-induced Mortality, which is higher than normal activity in most human tumor cells, is a death related gene induced by retinoic acid. It can directly and specifically inhibit the activity of STAT3 activated target gene transcription by STAT3,. Inhibition of target gene expression, thereby inhibiting tumor growth. The targeted treatment of tumor requires a specific carrier to direct the drug to the tumor. F3 peptide, which encodes 31 amino acids in the nitrogen terminal of human high migration histone 2 (HMGN2), has the function of binding specifically to tumor cells and tumor vascular endothelial cells. F3 peptide can bring drugs into cytoplasm and nucleus and can be used as a drug carrier for tumor targeting delivery. In this study, cDNA, of GRIM19 was cloned from human placenta tissue by gene cloning technique and F3-GRIM19 expression vector was constructed. The fusion protein F3-GRIM19 was expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. The biological activity of the fusion protein against tumor cell proliferation in vitro was identified, which laid a foundation for further study on its mechanism and clinical application. Part one: using Chinese placental tissue as material, total RNA, of GRIM19 was amplified by RT-PCR and cloned into pET32a () vector and sequenced. Prokaryotic expression vectors pQE30-GRIM19 and pQE30-F3-GRIM19, were constructed by subclone. IPTG induced expression. GRIM19 and F3-GRIM19 were purified by Ni2-NTA agarose resin affinity chromatography. Part two: MTT colorimetric assay was used to analyze the proliferative activity of target protein GRIM19 and F3-GRIM19 on normal HUVEC cells and human breast cancer MCF7,MDA-MB231 cells, respectively.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：Q78

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2375067