發(fā)布時(shí)間：2018-12-07 09:11

【摘要】：C-型凝集素超家族在機(jī)體的天然免疫和繼發(fā)免疫中發(fā)揮著重要功能，主要包括病原微生物的識(shí)別與清除以及免疫細(xì)胞的識(shí)別與遷移等。LSECtin是本實(shí)驗(yàn)室在國(guó)際上率先克隆并研究的一種新型凝集素分子，人LSECtin(hLSECtin)cDNA全長(zhǎng)1411bp，編碼293個(gè)氨基酸，為Ⅱ型跨膜糖蛋白，與已知的凝集素分子DC-SIGN、DC-SIGNR和CD23為同一家族，共屬于C型凝集素超家族。LSECtin特異表達(dá)于肝和淋巴結(jié)。由于其含有典型的CRD結(jié)構(gòu)域(糖基識(shí)別結(jié)構(gòu)域)，體外證實(shí)LSECtin蛋白能夠Ca~(2+)離子依賴性的結(jié)合甘露糖，巖藻糖和N-乙酰葡萄糖胺。我們的前期研究強(qiáng)烈提示LSECtin符合典型C型凝集素分子的結(jié)構(gòu)和功能特征，可能在機(jī)體免疫中發(fā)揮重要的功能(Liu et a1．J Biol Chem．2004，279：18748-58)。 本論文中，我們利用免疫組化結(jié)合免疫熒光共定位的實(shí)驗(yàn)方法，揭示LSECtin表達(dá)在肝臟的Kupffer細(xì)胞和竇內(nèi)皮細(xì)胞，為L(zhǎng)SECtin的功能研究奠定了組織學(xué)基礎(chǔ)。為了證實(shí)LSECtin是免疫細(xì)胞粘附分子的假設(shè)，我們篩選了一系列血細(xì)胞系，其中活化的人白血病T細(xì)胞系Jurkat與sLSECtin-Fc融合蛋白表現(xiàn)出很強(qiáng)的結(jié)合能力，，進(jìn)而我們分析LSECtin能否識(shí)別生理狀況下的血細(xì)胞，sLSECtin-Fc融合蛋白以及細(xì)胞膜表面的LSECtin均能粘附活化的外周血T細(xì)胞，這些結(jié)果表明LSECtin是肝臟中一種新的活化T細(xì)胞黏附分子。為了鑒定LSECtin在活化T細(xì)胞表面的配體，我們首先通過Far-Western實(shí)驗(yàn)確定了LSECtin在活化T細(xì)胞上的配體分子量，進(jìn)而利用生物質(zhì)譜技術(shù)鑒定配體，結(jié)果提示CD44為候選配體分子。在此基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步確證了LSECtin與CD44互為受體-配體分子對(duì)：(1)CD44封閉性抗體能抑制LSECtin與活化T細(xì)胞的粘附；(2)純化的LSECtin蛋白能粘附瞬時(shí)表達(dá)的CD44；(3)純化的CD44蛋白能粘附瞬時(shí)及穩(wěn)定表達(dá)的LSECtin。配體分子的確立為深刻揭示LSECtin在肝臟的生物學(xué)功能提供了強(qiáng)有力的依據(jù)與線索。
[Abstract]:C-type lectin superfamily plays an important role in innate and secondary immunity. LSECtin is a new type of lectin molecule firstly cloned and studied in our laboratory. The total length of human LSECtin (hLSECtin) cDNA is 1411bpand encoding 293 amino acids. Type 鈪

本文編號(hào)：2366965