【摘要】： 研究背景：特異性抑制排斥反應，誘導免疫耐受是器官移植面臨的主要挑戰(zhàn)之一。T細胞作為免疫反應的主要細胞，無論對免疫排斥還是免疫耐受都起到關鍵作用。T細胞活化需要MHC復合體提供第一信號及共刺激分子提供第二信號。CD80／CD86是重要的共刺激分子，通過與受體CD28／CTLA-4結合，調控T細胞活化及分化。CD80／CD86作為同源分子，一直被認為功能相似。但最近研究發(fā)現，二者功能不盡相同。對CD80／CD86與CD28／CTLA-4系統(tǒng)的生物物理學研究表明，CD80能與CTLA-4形成更穩(wěn)定的結合，有體內外實驗證實CD80能抑制T細胞增殖，而CD86不能，提示CD80很可能主要通過CTLA-4傳遞抑制信號，抑制免疫反應。 皮膚作為免疫原性最強的器官，常規(guī)異基因移植很難避免排斥反應。但有研究顯示，培養(yǎng)的小鼠皮膚角朊細胞同種異體移植后急性排斥反應不明顯，角朊細胞能被CD8~+T細胞識別，但不被排斥。另有研究發(fā)現少量自體角朊細胞與同種異體甚至異種角朊細胞混合培養(yǎng)后移植，，不發(fā)生明顯的急性排斥，慢性排斥也不明顯，移植皮片能長期存活，機理不明。我們前期實驗從基因和蛋白兩個層面證實培養(yǎng)的小鼠角朊細胞能單獨表達CD80蛋白，不表達CD86蛋白。實驗中還發(fā)現培養(yǎng)的小鼠心肌細胞也能單獨表達CD80蛋白。本研究進一步探討培養(yǎng)的近交系小鼠角朊細胞膜片誘導免疫低反應現象與角朊細胞單獨表達CD80共刺激分子的關系，并對同樣單獨表達CD80分子的小鼠心肌細胞也進行了免疫學相關檢測，用兩個不同細胞模型來驗證CD80單獨表達誘導免疫耐受的可能性。 研究方法：分別培養(yǎng)乳鼠角朊細胞及心肌細胞，通過免疫熒光、RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)檢測培養(yǎng)細胞CD80／CD86表達情況。將培養(yǎng)的角朊細胞和心肌細胞分別與預活化同種異體細胞毒性淋巴細胞(cytotoxicity Tlymphocyte，CTL)共培養(yǎng)，檢測殺傷率，另用不表達CD80分子或表達CD80但加入anti-CD80抗體的相同細胞作對照。為檢測自體角朊細胞在免疫耐受中有何作用，以培養(yǎng)的角朊細胞為調節(jié)細胞，以不同比例加入同基因和同種異基因脾細胞混合培養(yǎng)體系中，用MTT法測淋巴細胞增殖率。同樣用不表達CD80分子或表達CD80但加入anti-CD80抗體的相同細胞作對照。為檢測CD80是否通過CTLA-4途徑影響免疫反應，在上述表達CD80的細胞反應體系中，均加入anti-CTLA-4抗體，封閉CTLA-4通路。 結果：乳鼠角朊細胞培養(yǎng)1天后檢測，抗CD80抗體未顯色。培養(yǎng)7天后，抗CD80抗體顯色明顯加強，形態(tài)規(guī)則，胞核明顯。相同條件下檢測CD86表達，在培養(yǎng)1、7天時均未發(fā)現抗CD86抗體著色。乳鼠心肌細胞培養(yǎng)10天后增殖心肌細胞高表達CD80蛋白，而CD86蛋白檢測不到。RT-PCR顯示培養(yǎng)10天心肌細胞CD80 mRNA表達強度與β-actin相似，但CD86 mRNA表達很低。 CTL殺傷實驗中，培養(yǎng)7天同種異體角朊細胞殺傷率在各個E：T比時均低于培養(yǎng)1天角朊細胞。用anti-CD80抗體封閉CD80與anti-CTLA-4抗體封閉CTLA-4后，CTL殺傷率均上升，7天和1天培養(yǎng)的角朊細胞殺傷率相近。培養(yǎng)10天的同種異體心肌細胞在E：T從3：1到30：1時，殺傷率為6．36％到39．66％，加入anti-CD80和anti-CTLA-4抗體后，殺傷率幾乎增加了1倍。 單向混合淋巴細胞增殖實驗結果顯示，培養(yǎng)7天自體角朊細胞能抑制單向混合淋巴細胞增殖反應(mixed lymphacyte reaction，MLR)，并隨自體角朊細胞的增加，抑制增強，在E：T：auto-KC=1：1：1．5時到達最大效應。同種異體角朊細胞則不能抑制MLR，相反有促進作用。培養(yǎng)1天的角朊細胞也不能抑制MLR，其MLR增殖程度與未加角朊細胞MLR增殖程度相似略有增加。用抗體封閉培養(yǎng)7天角朊細胞CD80后，抑制作用消失，但仍低于培養(yǎng)1天角朊細胞。anti-CTLA-4阻斷CD80與CTLA-4結合，培養(yǎng)7天自體角朊細胞抑制作用也消失，甚至隨自體角朊細胞數量增加，有促進MLR的趨勢。 結論：本實驗結果提示，角朊細胞和心肌細胞等實體細胞在一定條件下能單獨表達CD80，與自身MHC分子配合，可成為一種有效的調節(jié)性抗原提呈細胞(regulatory antigen present cell，rAPC)，對免疫反應產生影響。CD80分子通過CTLA-4可抑制抗原特異性CTL殺傷。自體細胞還能通過CTLA-4抑制淋巴細胞的增殖反應。這種抑制涉及MHC分子。但本實驗尚未證實CD80是通過那一類細胞上的CTLA-4產生效應，同時還需進一步研究CD80與自身MHC分子共同作用抑制淋巴細胞增殖的具體機制。
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【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2364736