【摘要】： 巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是近年來廣泛用于表達(dá)外源基因的表達(dá)系統(tǒng)。該系統(tǒng)具有真核細(xì)胞和原核細(xì)胞的雙重特點,既可以對外源蛋白進行適當(dāng)加工、修飾,使目的蛋白的抗原性、免疫原性和活性與天然蛋白接近,也可以將外源蛋白以可溶的形式分泌到培養(yǎng)基中,使純化更為簡便,還可以在簡單培養(yǎng)基中迅速生長至高密度,從而得到大量有活性的目的蛋白。 本研究利用基因重組技術(shù)構(gòu)建了可融合表達(dá)人抗狂犬病毒小分子抗體ScFv-Fc的表達(dá)載體pPICZα-Fc/ScFv,電轉(zhuǎn)化畢赤酵母X-33后,篩選出穩(wěn)定高效的分泌表達(dá)ScFv-Fc抗體的基因工程菌株,并通過Protein A層析柱純化。經(jīng)SDS-PAGE,Western blot,ELISA鑒定重組抗體的生物學(xué)活性,結(jié)果表明,在畢赤酵母菌中可經(jīng)甲醇誘導(dǎo)產(chǎn)生具抗原結(jié)合活性的小分子分泌型抗體ScFv-Fc,并可方便的應(yīng)用Protein A進行純化。在抗體分子的克隆、篩選及小分子抗體的表達(dá)制備方面具有潛在價值。
[Abstract]:Pichia pastoris expression system is widely used to express foreign genes in recent years. The system has the dual characteristics of eukaryotic cells and prokaryotic cells. It can process and modify the foreign proteins properly, so that the antigenicity, immunogenicity and activity of the target proteins are close to those of natural proteins. The extraneous protein can also be secreted into the medium in soluble form, which makes purification more convenient, and can grow rapidly to a high density in the simple medium, thus a large number of active target proteins can be obtained. In this study, the expression vector pPICZ 偽-Fc/ScFv, which can express human rabies virus small molecule antibody ScFv-Fc, was constructed by gene recombination technique and transformed into Pichia pastoris X-33. A stable and efficient recombinant strain secreting ScFv-Fc antibody was screened and purified by Protein A chromatography. The biological activity of recombinant antibody was identified by SDS-PAGE,Western blot,ELISA. The results showed that small secretory antibody ScFv-Fc, with antigen-binding activity could be induced by methanol in Pichia pastoris and purified by Protein A. It has potential value in cloning, screening of antibody molecules and preparation of small molecular antibodies.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：2361762