【摘要】： 缺鐵是一常見的兒科疾病，臨床研究發(fā)現(xiàn)缺鐵與情感淡漠、煩躁、焦慮、活動減退，以及認(rèn)知和注意力減退相聯(lián)系。尤其是發(fā)育早期的缺鐵被認(rèn)為與生長和認(rèn)知發(fā)展延遲密切相關(guān)，并且可能對認(rèn)知行為導(dǎo)致不可逆的損傷。 在圍產(chǎn)期的幼兒大腦發(fā)育中，腦鐵降低被證實與髓鞘化不足、多巴胺能的功能損害和神經(jīng)成熟延遲相關(guān)。發(fā)育早期缺鐵可以產(chǎn)生一系列行為與認(rèn)知方面的改變，引起機體活性和對環(huán)境的反應(yīng)降低，這些行為在某種程度上與黑質(zhì)紋狀體和邊緣系統(tǒng)中的多巴胺功能相關(guān)。已有研究顯示缺鐵可以降低D1和D2受體在尾狀核中的密度以及D2受體和多巴胺轉(zhuǎn)運體在依伏神經(jīng)核中的密度，發(fā)育早期缺鐵所引起的多巴胺受體及轉(zhuǎn)運體變化并不能為后期補鐵所完全糾正。目前，缺鐵對行為發(fā)育的影響及與腦內(nèi)多巴胺受體關(guān)系的研究，已成為國內(nèi)外研究的熱點之一。 多巴胺受體可分為D1類和D2類受體，D1類受體包括D1和D5受體，在腦內(nèi)主要調(diào)控邊緣系統(tǒng)的活動，與認(rèn)知功能有關(guān)。D5受體與D1受體的跨膜區(qū)相似性達到80％，對多巴胺的親和力比D1受體高，在腦內(nèi)主要分布于前額腦錐體細(xì)胞層以及海馬、基底節(jié)區(qū)、丘腦等部位。神經(jīng)藥理研究尚未發(fā)現(xiàn)區(qū)分D1受體和D5受體的特異性藥物，D5受體與D1受體各自的功能異同及其意義，一直是令人感興趣的問題，本實驗的目的是觀察發(fā)育早期缺鐵(ID)和無缺鐵(CN)大鼠腦內(nèi)多巴胺D5受體表達及行為的變化，以探討發(fā)育早期缺鐵對腦內(nèi)多巴胺D5受體表達的影響及其與發(fā)育和行為改變的可能關(guān)系。 材料和方法 一、材料 SD大鼠由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供。鐵適量膳食(40mg鐵／kg，)、鐵缺乏膳食(3-5mg鐵／kg)均由美國Harlan Teklad公司提供�？苟喟桶稤5受體單克隆抗體由美國CHEMICON公司提供。 二、方法 1、建立動物模型 16只SD成年雌鼠接受鐵適量飲食1周調(diào)整體內(nèi)鐵狀態(tài)后配種，以發(fā)現(xiàn)陰道栓為孕0天，隨機分為兩組，缺鐵組(ID組)(n=8)接受鐵缺乏飲食(3-5mg鐵／kg)，對照組(CN組)(n=8)接受鐵適量飲食(40mg鐵／kg，)。懷孕3周后雌鼠娩出仔鼠(缺鐵組n=70，對照組n=85)，以初生當(dāng)天記為出生后0天(P0)。仔鼠生后滿21天起斷乳，分別喂飼與母鼠相同的飲食，直至生后25天。25天后，兩組仔鼠均喂飼鐵適量飲食。母鼠在孕0、孕20天鼠尾采血，測定血紅蛋白(Hb)、血球壓積(Hct)等血液學(xué)指標(biāo)以評估血鐵水平。 2、行為功能評估 于生后6、9、12、15、18、21天進行發(fā)育里程碑評估(包括前肢懸掛試驗、翻身校正能力試驗，反趨地性反應(yīng)試驗)，生后24，29天進行觸須前肢放置試驗測試感覺運動功能，生后15、25、35天進行曠場試驗測試情緒認(rèn)知相關(guān)行為。 3、腦冰凍切片免疫熒光染色-熒光顯微鏡掃描檢測 于仔鼠出生后15、25、35天，行全腦制備冰凍切片進行免疫熒光染色后，熒光顯微鏡下觀察掃描及照相，觀察缺鐵組和對照組多巴胺D5受體表達情況。 4、統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS／PC+統(tǒng)計軟件，不同組間數(shù)據(jù)比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)各日齡間采用One-Way ANOVA方法進行比較。 結(jié)果 1、動物模型建立結(jié)果 (1)兩組母鼠監(jiān)測體重均無顯著性差異(P＞0.05)。缺鐵組母鼠孕20天血紅蛋白(Hb)及血球壓積(Hct)值與自身孕0天及對照組比較均有顯著降低(P＜0.001)。 (2)缺鐵組仔鼠體重增加慢，體形小，，行動遲緩，反應(yīng)遲鈍，張眼晚，毛發(fā)萌出晚且稀疏；兩組仔鼠體重在同日齡比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 2、行為功能評估結(jié)果 (1)缺鐵組仔鼠與同日齡對照組比較懸吊時間明顯縮短，兩者具有顯著性差異(P＜0.05)，缺鐵組仔鼠與同日齡對照組比較翻身校正時間和反趨地性反應(yīng)所用時間與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 (2)出生后24、29天，缺鐵組仔鼠與同日齡對照組(CN)比較兩側(cè)觸須前肢放置反應(yīng)均有顯著性差異(P＜0.05)。 (3)生后15天，缺鐵組(ID)仔鼠垂直勘探次數(shù)與理毛次數(shù)明顯小于對照組(P＜0.05)；生后25天，缺鐵組仔鼠水平活動格數(shù)、垂直勘探次數(shù)及理毛次數(shù)均明顯小于對照組(P＜0.001)；生后35天，缺鐵組仔鼠水平活動格數(shù)小于對照組(P＜0.05) 3、免疫熒光研究結(jié)果 (1)仔鼠生后15、25、35天，缺鐵組仔鼠基底節(jié)區(qū)多巴胺D5體陽性表達明顯低于對照組(P＜0.001)。 (2)缺鐵組仔鼠生后25天D5受體陽性表達顯著高于同組15日齡(P＜0.001)。生后35天陽性表達要明顯高于同組25日齡(P＜0.05)。 (3)對照組仔鼠生后25天的D5受體陽性表達要顯著高于同組15日齡(P＜0.05)，而與同組35日齡比較無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論 1、圍產(chǎn)期缺鐵的母鼠所生仔鼠可以表現(xiàn)出明顯的發(fā)育遲滯，表現(xiàn)為體重增長緩慢，生理發(fā)育指標(biāo)明顯落后，行動遲緩，反應(yīng)遲鈍。 2、發(fā)育早期缺鐵對于仔鼠的一般運動協(xié)調(diào)能力、反射發(fā)育、感覺運動功能，情緒認(rèn)知活動都有不同程度的損傷，而一部分感覺運動功能和情緒認(rèn)知活動改變在一定時間的后期補鐵中不能被完全糾正。 3、多巴胺D5受體在腦內(nèi)的發(fā)育表達遵循一定的時間變化規(guī)律。 4、發(fā)育早期缺鐵仔鼠腦內(nèi)多巴胺D5受體表達下降，腦基底節(jié)區(qū)多巴胺D5受體表達峰值出現(xiàn)延后。一定時間的補鐵不能使腦基底節(jié)區(qū)多巴胺D5受體的表達恢復(fù)正常。
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【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R363

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張黎;趙正言;;發(fā)育早期缺鐵的行為改變與腦內(nèi)區(qū)域性多巴胺功能變化[J];國際兒科學(xué)雜志;2006年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 張科進;多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)基因與秦巴山區(qū)兒童精神發(fā)育遲滯的相關(guān)性研究[D];西北大學(xué);2007年

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本文編號：2352943