【摘要】： 著床過程中,胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞與母體子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞間最初的分子識(shí)別和黏附是胚胎成功植入的關(guān)鍵。研究表明:子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表達(dá)選擇素的寡糖配體唾液酸化Lewis x(sLex),可與胚胎表面的選擇素特異性結(jié)合,并在介導(dǎo)胚胎著床的初始分子黏附過程中發(fā)揮重要作用。α1,3-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅶ(FUT7)是細(xì)胞表面sLex合成的關(guān)鍵酶。FUT7基因的表達(dá)是影響sLex合成及調(diào)控合成水平的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)選用了人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(RL95-2)和人絨毛膜癌細(xì)胞(JAR)的體外胚胎著床模型,具有更能模擬在體著床的特性。通過觀察重組人FUT7在RL95-2及JAR細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)對(duì)體外著床模型黏附以及FUT7在小鼠子宮內(nèi)膜內(nèi)過表達(dá)對(duì)在體胚胎著床的影響,探討FUT7在胚胎植入中表達(dá)調(diào)控的機(jī)理。本實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR方法從正常人白細(xì)胞中獲得FUT7全長(zhǎng)基因,構(gòu)建以綠色熒光蛋白為報(bào)告基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP-FUT7;對(duì)RL95-2及JAR細(xì)胞體外模型的雙向識(shí)別特性進(jìn)行了檢測(cè);以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入RL95-2及JAR細(xì)胞,采用半定量RT-PCR、流式細(xì)胞和間接免疫熒光方法,檢測(cè)FUT7及sLex表達(dá)的變化;分析FUT7/sLex表達(dá)變化對(duì)體外著床模型中胚胎黏附的影響;以及受孕小鼠宮角注射pIRES2-EGFP-FUT7后觀察胚胎著床數(shù)的變化。通過以上的工作得出以下結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建并鑒定了真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-EGFP-FUT7;檢測(cè)到RL95-2與JAR細(xì)胞中均有L-選擇素(L-selectin)及其配體sLex的表達(dá),并且與黏附特性相關(guān);FUT7過表達(dá)組與對(duì)照組相比,FUT7及sLex的表達(dá)均明顯上調(diào),且二者表達(dá)為正相關(guān);體外黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明未經(jīng)轉(zhuǎn)染組JAR與RL95-2細(xì)胞的黏附率為69.7%,RL95-2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染FUT7后黏附率是84.3%,JAR細(xì)胞轉(zhuǎn)染FUT7后黏附率上升為86.6 %,RL95-2與JAR細(xì)胞均轉(zhuǎn)染FUT7后其黏附率明顯增加為89.4%,sLex抗體(5μg/ml)封閉RL95-2細(xì)胞后,黏附率下降為35.3%。sLex抗體(5μg/ml)封閉JAR細(xì)胞后黏附率為33.9%。受孕小鼠在體實(shí)驗(yàn)宮角注射FUT7過表達(dá)組著床數(shù)也顯著增高;根據(jù)以上結(jié)果得出結(jié)論:JAR及RL95-2細(xì)胞體外著床模型系統(tǒng)具有雙向識(shí)別的特性;L-選擇素及其配體sLex參與了JAR與RL95-2細(xì)胞間的雙向識(shí)別;FUT7基因過表達(dá)能通過上調(diào)RL95-2及JAR細(xì)胞表面sLex的表達(dá)而提高體外著床模型中胚胎黏附率;FUT7基因過表達(dá)能促進(jìn)在體胚胎的著床。對(duì)巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)及調(diào)控的研究不僅有助于寡糖在著床過程中作用機(jī)制的探討,并將為利用糖生物學(xué)手段進(jìn)行著床過程的干預(yù)提供新的思路和手段。
[Abstract]:During implantation, the initial molecular recognition and adhesion between trophoblast cells and maternal endometrial epithelial cells is the key to successful implantation of embryos. Studies have shown that sialyl Lewis x (sLex), an oligosaccharide ligand expressing selectin in endometrial epithelial cells, can specifically bind to selectin on the surface of embryo. 偽 _ 1C _ 3-fucosyltransferase 鈪，

本文編號(hào)：2339477