【摘要】：目的:制備出一種具有多種用途的抗蛋白酶激活受體-2(PAR-2)單克隆抗體(mAb)。方法:用人工合成的11肽PAR-2作為免疫原,采用皮下多點注射方法免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與NS-1骨髓瘤細胞融合,雜交瘤細胞采用間接ELISA法篩選。通過ELISA、Dot blot、免疫組化染色、流式細胞分析、激光共聚焦顯微鏡技術鑒定mAb的特異性。結果:獲得1株可穩(wěn)定分泌抗PAR-2 mAb的雜交瘤細胞。其分泌的mAb為IgM型,ELISA法檢測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清效價為1:16;點雜交分析表明此抗體可特異性結合PAR-2;免疫組化染色顯示該單克隆抗體與人肺組織中的肺泡上皮細胞和平滑肌細胞,結腸組織中的腺上皮細胞和疑似淋巴細胞,扁桃體中的淋巴細胞,包皮組織中的鱗狀上皮細胞呈陽性反應;流式細胞儀分析顯示與人肺腺癌細胞系A549細胞中的PAR-2呈陽性反應;激光共聚焦掃描顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)熒光標記的陽性反應物位于A549細胞的胞膜和胞漿。結論:成功地制備出可用于免疫組化和點雜交的抗PAR-2單克隆抗體,為PAR-2相關性疾病的研究提供了有用的工具。
[Abstract]:Objective: to prepare a multi-purpose monoclonal antibody (mAb).) against protease activated receptor-2 (PAR-2). Methods: BALB/c mice were immunized with synthetic 11-peptide PAR-2. Spleen cells were fused with NS-1 myeloma cells and hybridoma cells were screened by indirect ELISA method. The specificity of mAb was identified by ELISA,Dot blot, immunohistochemical staining, flow cytometry and laser confocal microscopy. Results: a hybridoma cell which could secrete anti PAR-2 mAb stably was obtained. The mAb secreted was IgM type. The titer of the supernatant of hybridoma cell culture detected by ELISA assay was 1: 16. Dot blot analysis showed that the antibody could specifically bind to PAR-2;. Immunohistochemical staining showed that the monoclonal antibody was associated with alveolar epithelial cells and smooth muscle cells in human lung tissue, glandular epithelial cells and suspected lymphocytes in colon tissue, lymphocytes in tonsils, The squamous epithelial cells in the prepuce tissue showed positive reaction. Flow cytometry analysis showed that PAR-2 was positive in human lung adenocarcinoma cell line A549, and the fluorescent labeled positive reaction was located in the membrane and cytoplasm of A549 cell by confocal laser scanning microscopy. Conclusion: monoclonal antibodies against PAR-2 can be successfully prepared for immunohistochemistry and dot hybridization, which provide a useful tool for the study of PAR-2 related diseases.
【作者單位】： 汕頭大學醫(yī)學院變態(tài)反應學與炎癥學研究所 汕頭大學醫(yī)學院變態(tài)反應學與炎癥學研究所 汕頭大學醫(yī)學院變態(tài)反應學與炎癥學研究所 汕頭大學醫(yī)學院變態(tài)反應學與炎癥學研究所 汕頭大學醫(yī)學院變態(tài)反應學與炎癥學研究所
【基金】：廣東省重點科技計劃資助項目(2003831502) 廣東省自然科學基金(04106122)
【分類號】：R392.11

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 王海燕,何韶衡,付意玲,方澤曼;人肺上皮細胞表達蛋白酶激活受體[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年17期

2 王海燕,何韶衡;蛋白酶激活受體2激動劑誘導上皮細胞分泌MCP-1[J];第四軍醫(yī)大學學報;2004年19期

3 康振華,王為忠,陳冬利,王春艷,朱參勝,杜俊峰,金伯泉;抗人RANTES分子單克隆抗體的制備及特性鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2005年03期

【共引文獻】

相關期刊論文 前3條

1 王海燕,何韶衡,鄭燕珊;蛋白酶激活受體1介導人肺上皮細胞分泌MCP-1[J];第三軍醫(yī)大學學報;2005年17期

2 王海燕,何韶衡,付意玲,方澤曼;人肺上皮細胞表達蛋白酶激活受體[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年17期

3 陳玉珍;何韶衡;周艷春;黃闐;劉岳寧;陳霖霏;;抗人分泌性白細胞蛋白酶抑制劑單克隆抗體的制備與鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2006年01期

相關博士學位論文 前1條

1 彭濤;抗凝治療在TNBS誘導的大鼠實驗性結腸炎模型中的作用[D];北京大學;2008年

相關碩士學位論文 前1條

1 楊曉玉;抗蛋白酶激活受體-2單克隆抗體的制備與鑒定[D];汕頭大學;2007年

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 楊建軍,王為忠,李瑞,李紀鵬;趨化因子受體拮抗劑對大鼠小腸移植的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2004年05期

2 王海燕,何韶衡;蛋白酶激活受體2激動劑誘導上皮細胞分泌MCP-1[J];第四軍醫(yī)大學學報;2004年19期

3 許曉光,朱勇,劉雪松,田瑩,曹云新,劉瑩,戶義,金伯泉;抗人CD100單克隆抗體的制備與初步鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2003年01期

4 戶義,劉雪松,朱勇,劉瑩,許曉光,薛江楠,金伯泉;抗Ig融合蛋白Fc段單克隆抗體的制備、鑒定與應用研究[J];細胞與分子免疫學雜志;2003年02期

5 李元新,黎介壽,李寧;大鼠小腸移植的外科技術[J];世界華人消化雜志;1998年08期

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 裴冀男;;單克隆抗體制備例談[J];高中生學習(高二版);2011年05期

2 孫厚良;魏大鵬;張小洪;劉彥君;章崇杰;;抗hMOF單克隆抗體的制備與鑒定[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2011年05期

3 孔桂美;張小榮;黃瑤;高巍;廖月霞;卜平;;人VEGF受體Ⅱ胞外Ⅲ區(qū)單克隆抗體研制與生物學活性測定[J];揚州大學學報(農業(yè)與生命科學版);2011年02期

4 曹黎黎;劉丹丹;衛(wèi)娜;高明春;王君偉;;牛IFN-γ單克隆抗體的制備及鑒定[J];中國獸醫(yī)科學;2011年07期

5 杜春紅;王鵬;張建中;唐雪;宋志忠;;鼠疫耶爾森氏菌Pla蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年09期

6 吳曉彤;潘磊;唐超智;;單克隆抗體抗腫瘤藥物研究進展及其市場動態(tài)[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報;2011年04期

7 孫慧慧;王旭;王惠國;譚建華;樸敬愛;樸君;馬彪;劉慶平;李文哲;;C-myc單克隆抗體的制備及鑒定[J];免疫學雜志;2011年08期

8 錢琨;金文杰;邵紅霞;吳建明;秦愛建;;抗Fc受體γ鏈單克隆抗體的研制及生物學特性鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年07期

9 丁細霞;狄飚;車小燕;;抗Ⅳ型登革病毒NS1單克隆抗體的制備及特性鑒定[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年07期

10 李琦;徐竹蔚;宋朝君;田瑩;陳麗華;李永明;張葵;金伯泉;;抗AFP單克隆抗體夾心ELISA檢測試劑盒的研制及應用[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年08期

相關會議論文 前10條

1 李振宇;趙益明;董寧征;沈飛;阮長耿;;抗FⅧ-C2區(qū)單克隆抗體的制備及鑒定[A];第11次中國實驗血液學會議論文匯編[C];2007年

2 陶薇;楊連華;何卓晶;洪艷;陳勇;;抗戊型肝炎病毒重組蛋白單克隆抗體的制備和鑒定[A];浙江省醫(yī)學會醫(yī)學微生物與免疫學及醫(yī)學病毒學學術年會論文匯編[C];2009年

3 馬翠卿;郭奕陽;顧海燕;曾瑞紅;楊麗娟;魏林;;一株抗A族鏈球菌表面蛋白Fba的單克隆抗體對應的表位與Fba結合調節(jié)蛋白FH的位點重疊[A];河北省免疫學會第六次免疫學大會資料匯編[C];2010年

4 杜雪梅;唐麗;任飛W，

本文編號：2335971