【摘要】：目的 構(gòu)建人皰疹病毒8型(HHV8)小衣殼蛋白(ORF65)的原核高效表達克隆,制備用于HHV8感染血清學(xué)診斷的基因工程抗原。 方法 應(yīng)用BCBL-1細(xì)胞(HHV8陽性而EBV陰性)制備粗提細(xì)胞抗原,并用Sephadex G-75層析柱初步純化,獲得HHV8細(xì)胞工程抗原。應(yīng)用PCR技術(shù)擴增HHV8 ORF65編碼區(qū),PCR產(chǎn)物與原核表達載體pThioHisA分別雙酶切后連接,轉(zhuǎn)化宿主菌E.coli BL21,IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達,經(jīng)帶有6個組氨酸標(biāo)簽的親和層析柱純化獲得基因工程抗原,Western blot檢測其抗原性和特異性。選擇最適抗原濃度包被96孔ELISA反應(yīng)板,對相關(guān)病人進行檢測,并與Biotrin公司生產(chǎn)的HHV8 IgM和HHV8 IgG抗體IFA檢測試劑盒和Qiagen公司ELISA檢測試劑盒進行比較。 結(jié)果 HHV8 ORF65小衣殼蛋白可在E.coli BL21中高效表達,Western blot檢測結(jié)果表明該融合蛋白可與5份HHV8特異性IgM陽性血清的4份(80%)和所有10份(100%)HHV8特異性IgG陽性血清發(fā)生反應(yīng),而10份陰性血清均不與之發(fā)生反應(yīng)�；蚬こ炭乖母黜椉夹g(shù)指標(biāo)與Biotrin公司和Qiagen公司檢測試劑盒有較好的符合率。 結(jié)論 HHV8 ORF65重組蛋白具有良好的抗原性和特異性,進一步完善后可用于HHV8感染的臨床檢測,為進一步研制開發(fā)新型HHV8診斷試劑提供了有價值的理論和實驗依據(jù)。
[Abstract]:Objective to construct a prokaryotic expression clone of small capsid protein (ORF65) of human herpesvirus type 8 (HHV8) and to prepare a genetically engineered antigen for serological diagnosis of HHV8 infection. Methods BCBL-1 cells (HHV8 positive but EBV negative) were used to prepare the crude extracellular antigen, and the HHV8 cell engineering antigen was obtained by Sephadex G-75 chromatographic column. The coding region of HHV8 ORF65 was amplified by PCR, and the PCR product was digested with the prokaryotic expression vector pThioHisA, respectively. The expression of fusion protein was induced by transforming the host strain E.coli BL21,IPTG. The genetic engineering antigen (, Western blot) was purified by affinity chromatography with six histidine labels to detect its antigenicity and specificity. The optimal antigen concentration was coated with 96 well ELISA reaction plate to detect the patients concerned and compared with the HHV8 IgM and HHV8 IgG antibody IFA test kit produced by Biotrin and Qiagen ELISA test kit. Results HHV8 ORF65 capsid protein was highly expressed in E.coli BL21. The results showed that the fusion protein could react with 4 (80%) of 5 HHV8 specific IgM positive sera and 10 (100%) HHV8 specific IgG positive sera. None of the 10 negative sera reacted with it. The technical parameters of genetic engineering antigen were in good agreement with the detection kit of Biotrin and Qiagen. Conclusion the recombinant HHV8 ORF65 protein has good antigenicity and specificity and can be used in the clinical detection of HHV8 infection. It provides a valuable theoretical and experimental basis for the further development of a new HHV8 diagnostic reagent.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙遠(yuǎn);魯帥堯;和占龍;禹文海;王俊斌;;ELISA方法檢測恒河猴血清中抵抗素[J];實驗動物科學(xué);2011年03期

2 宋麗敏;張維;陳明;林敏;潘家榮;;抗微囊藻毒素單鏈抗體基因的構(gòu)建、表達及初步鑒定[J];高技術(shù)通訊;2010年03期

3 曾妮;宮苗苗;郭李平;邱文英;李剛;;狂犬病病毒N蛋白主要抗原區(qū)的表達及SPA-ELISA抗體檢測方法的建立[J];生物工程學(xué)報;2011年08期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 邢春蓮;徐陽陽;趙蕊;楊一;崔立莉;曹健榮;;血篩產(chǎn)品(ELISA)檢測能力的評價[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

2 劉辰庚;王培昌;;血清抗碳酸酐酶Ⅲ抗體ELISA檢測方法的建立與初步應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 王凱;虞偉;高德玉;白彩琴;嚴(yán)孝嶺;李曉軍;;特異性ACPA免疫復(fù)合物ELISA檢測法的建立及其應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 劉少寧;張興曉;鄒金峰;謝之景;朱巖麗;趙欽;周恩民;姜世金;;檢測DuCV抗體ELISA方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 黃立平;劉長明;危艷武;陸月華;郭龍軍;;檢測豬圓環(huán)病毒2型血清中和抗體阻斷ELISA方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

6 王麗;朱立葦;徐霄勤;楊雪梅;王擁軍;呂杭軍;;4項目復(fù)合ELISA室內(nèi)質(zhì)控品制備方法的建立和評估[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

7 王輝;姚松濤;劉群;;檢測弓形蟲血清抗體的SPA-ELISA診斷方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

8 喬明明;申屠芬琴;馬永纓;楊欣艷;楊璐;孫明;;豬瘟抗體間接ELISA檢測試劑盒研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)豬學(xué)分會第五次全國會員代表大會暨養(yǎng)豬業(yè)創(chuàng)新發(fā)展論壇論文集[C];2010年

9 肖一紅;呂軍華;聶力;馬曉春;周恩民;;高致病性與傳統(tǒng)型PRRSV鑒別診斷間接ELISA方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 韓金樂;賈繼宗;李川;楊亮;何德磊;李娟;葉祥忠;李益民;;腸道病毒71抗原ELISA定量檢測方法構(gòu)建及其應(yīng)用[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 何源;走近法國軟件產(chǎn)業(yè)[N];電腦報;2003年

2 高彥生;OIE疫情專遞[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

3 高彥生;OIE疫情專遞[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

4 上海市艾滋病監(jiān)測中心供稿;迎戰(zhàn)“艾魔”二十載回眸[N];文匯報;2000年

5 高彥生;OIE疫情專遞[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

6 庾志成;全球手機電視業(yè)務(wù)發(fā)展透視[N];人民郵電;2004年

7 高彥生;OIE疫情專遞[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

8 高彥生;OIE疫情專遞[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

9 胡木成;獸藥安全評價與殘留檢測技術(shù)研究獲重大進展[N];科技日報;2004年

10 康慨;生死學(xué)大師庫伯勒-羅斯去世[N];中華讀書報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 宋振梅;Clusterin在食管鱗癌中表達的研究與應(yīng)用[D];山東大學(xué);2005年

2 何繼紅;阿維菌素類藥物多殘留分析方法的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 張愛霞;抗GP73、HDGF抗體的制備、夾心ELISA法的建立及臨床初步應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

4 曹丙蕾;山羊IL-18定量抗原捕獲ELISA檢測方法的建立及其免疫增強作用的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 鄧省亮;己烯雌酚和雙烯雌酚單克隆抗體的制備及ELISA方法的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

6 耿宏偉;藍(lán)舌病病毒群特異性構(gòu)象抗原表位的初步鑒定及競爭ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

7 商紹彬;豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白抗原表位的精細(xì)定位與間接ELISA檢測技術(shù)[D];浙江大學(xué);2007年

8 齊眉;人皰疹病毒8型重組蛋白的制備和應(yīng)用及其感染的流行病學(xué)調(diào)查[D];山東大學(xué);2006年

9 王斌;甲型H1N1流感病毒特異性抗原捕獲ELISA方法的建立及通用型豬流感疫苗基礎(chǔ)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

10 樂濤;多西環(huán)素殘留免疫學(xué)快速檢測技術(shù)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張心聲;人皰疹病毒8型（HHV-8）的基因表達及流行病學(xué)調(diào)查研究[D];山東大學(xué);2005年

2 鞠興東;人皰疹病毒8型基因工程抗原的制備和應(yīng)用[D];青島大學(xué);2005年

3 范秋佳;己烯雌酚人工抗原合成研究及ELISA檢測方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 李子平;牛附紅細(xì)胞體特異性抗原制備及雙抗體夾心ELISA診斷方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

5 尹衍新;基于CjaA蛋白檢測雞空腸彎曲菌抗體的間接ELISA方法建立及其單克隆抗體研制[D];揚州大學(xué);2010年

6 侯美如;牛輪狀病毒的分離鑒定及其雙抗體夾心ELISA方法建立[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2011年

7 趙剛;狂犬病病毒P蛋白的原核表達及間接ELISA檢測方法的建立[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 文永平;鴨瘟病毒TK基因轉(zhuǎn)錄與表達時相及TK重組蛋白ELISA方法的建立和應(yīng)用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 宋宇;魏氏梭菌α毒素基因的克隆表達及間接ELISA方法的初步研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 王凈;CPV VP2截短基因的克隆表達及雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

，

本文編號：2309310