【摘要】：白血病抑制因子(LIF)是一種多效性細胞因子,作用于多種細胞組織發(fā)揮不同的生物學作用,廣泛調(diào)節(jié)細胞的生長、增殖和分化。如抑制胚胎干細胞的體外分化;刺激血小板生成,造血細胞增殖;促進成骨細胞增殖;促進神經(jīng)原形成,肌肉衛(wèi)星細胞的增殖,參與神經(jīng)肌肉修復;參與肝的急性期反應,參與炎癥的生理病理過程等。這些生物學效應有賴于其結(jié)合靶細胞膜上的LIF受體α亞基(gp190),與另一亞基(gp130)形成異源性二聚體,激活下游信號轉(zhuǎn)導通路。gp190(LIFRα亞基)是低親和力的LIF特異性受體,屬于造血細胞素受體超家族,缺乏內(nèi)生激酶的活性。生理狀態(tài)下存在可溶性LIFR和跨膜LIFR�？扇苄允荏w,游離于胞外,無跨膜區(qū)和細胞內(nèi)區(qū),對LIF發(fā)揮的正常生理效應有拮抗效應�？缒IFR(gp190)胞內(nèi)區(qū)含三個功能域——BOX1、2、3。YXXQ序列位于遠膜端(Y酪氨酸,X任意氨基酸,Q谷氨酰胺),與STAT3的SH2位點特異性識別結(jié)合。細胞內(nèi)是否存在胞內(nèi)區(qū)游離受體,胞內(nèi)區(qū)受體游離后如何影響信號傳遞,發(fā)揮其生物學效應?有關(guān)膜受體信號啟動位點的游離多肽對細胞增殖分化的影響已有報道,提示我們,單一亞基的單一信號啟動位點在離膜狀態(tài)下完全能夠在細胞內(nèi)啟動相應的信號轉(zhuǎn)導通路。LIF信號傳導激活JAK-STAT途徑和RAS-MAPK途徑,我們前期研究根據(jù)gp190細胞內(nèi)區(qū)的不同功能域分別設(shè)計了兩種小分子——190CT2+3(含BOX2+3)和190CT3(含BOX3),發(fā)現(xiàn)gp190細胞內(nèi)區(qū)的多個功能域成為游離多肽在細胞內(nèi)存在時,對細胞分化有不同的影響,激活不同的信號分子。為進一步驗證前期工作,研究發(fā)生機制,本研究成功獲得了重組190CT2+3和190CT3兩種白血病HL-60細胞株,并進一步對190CT3的YXXQ基團定點突變研究相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定表達重組目的基因(190CT2+3和190CT3)的腫瘤細胞,增殖均受到抑制,促進細胞成熟分化,JAK/STAT3通路激活;通過該研究,我們明確了gp190不同的功能域190CT2+3、190CT3在胞內(nèi)游離存在時,對急性早幼粒白血病細胞HL-60增殖分化的功能效應和相
[Abstract]:Leukemia inhibitory factor (LIF) is a multipotent cytokine, which acts on various cell tissues and plays different biological roles, and regulates cell growth, proliferation and differentiation widely. Such as inhibiting the differentiation of embryonic stem cells in vitro, stimulating platelet formation, hematopoietic cell proliferation, promoting osteoblast proliferation, promoting neurogen formation, proliferation of muscle satellite cells, and participating in neuromuscular repair. Participate in the acute stage of liver reaction, participate in the physiological and pathological process of inflammation, etc. These biological effects depend on its binding to the LIF receptor 偽 subunit (gp190) on the target cell membrane, forming heterodimer with another subunit (gp130) and activating the downstream signal transduction pathway. Gp190 (LIFR 偽 subunit) is a low affinity LIF specific receptor. It belongs to the hematopoietic receptor superfamily and lacks the activity of endogenous kinase. Soluble LIFR and transmembrane LIFR. exist in physiological state Soluble receptors, free from extracellular, transmembrane and intracellular regions, have antagonistic effects on the normal physiological effects of LIF. Transmembrane LIFR (gp190) contains three functional domains-BOX1,2,3.YXXQ sequence located at the distal end of the membrane (Y tyrosine, X arbitrary amino acid, Q glutamine), which binds specifically to the SH2 site of STAT3. Is there a intracellular free receptor in the cell? how does the intracellular receptor affect signal transduction and exert its biological effect? The effects of free peptides on cell proliferation and differentiation at the membrane receptor signal initiation site have been reported, suggesting that we, The single signal priming site of the single subunit can activate the corresponding signal transduction pathway in the cell under the condition of membrane separation. LIF signal transduction activates the JAK-STAT pathway and the RAS-MAPK pathway. We designed two kinds of small molecules, 190CT2 3 (including BOX2 3) and 190CT3 (including BOX3), according to the different functional domains of the intracellular region of gp190. We found that many functional domains of the intracellular region of gp190 become free peptides in the cell. It has different effects on cell differentiation and activates different signal molecules. In order to further verify the previous work and study the pathogenesis, two leukemia HL-60 cell lines, recombinant 190CT2 3 and 190CT3, were successfully obtained in this study, and the signal transduction pathway related to the YXXQ group site-directed mutation of 190CT3 was further studied. It was found that the proliferation of tumor cells expressing recombinant target genes (190CT2 3 and 190CT3) was inhibited, the cell maturation and differentiation were promoted, and the JAK/STAT3 pathway was activated. Through this study, we have determined the functional effect and phase of 190CT2 3190CT3 on the proliferation and differentiation of acute promyelocytic leukemia cell line HL-60 in the presence of different functional domains of gp190 in the presence of intracellular 190CT2 3190CT3.
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R341

【共引文獻】

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本文編號：2307920