【摘要】： 為探討多藥耐藥基因(mdr1)導(dǎo)入人胎盤源性間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)能否提高其對化療藥物的耐受性,我們采用灌流法聯(lián)合密度梯度離心法自胎盤組織中分離擴(kuò)增MSCs,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將攜帶有mdr1基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入293T包裝細(xì)胞,獲得的病毒上清重復(fù)感染MSCs,通過RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光染色檢測mdr1基因在MSCs基因組中的整合和表達(dá),同時(shí)對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生物學(xué)特性及多向分化潛能加以測定;羅丹明排泌試驗(yàn)檢測基因編碼產(chǎn)物P-g170的功能活性,MTT法測定轉(zhuǎn)染MSCs對多種化療藥物耐受性。在此基礎(chǔ)上,采用γ-Co60照射法建立裸鼠骨髓造血功能損傷模型,研究轉(zhuǎn)染MSCs經(jīng)靜脈回輸后對紫杉醇化療的保護(hù)作用。結(jié)果表明,mdr1基因可于MSCs中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和表達(dá),轉(zhuǎn)染后MSCs仍符合干細(xì)胞的生物學(xué)特性。基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞可表達(dá)有功能活性的P-g170,且表現(xiàn)出典型的多藥耐藥表型,mdr1-MSCs體內(nèi)移植可對裸鼠外周血和骨髓細(xì)胞的生成起化療保護(hù)作用。結(jié)果提示,由逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)mdr1基因轉(zhuǎn)染人胎盤源性MSCs可獲得高效、穩(wěn)定的功能性蛋白表達(dá),此轉(zhuǎn)染行為對于維持MSCs的干細(xì)胞特性是安全可行的,通過轉(zhuǎn)染MSCs的體內(nèi)移植能夠增強(qiáng)機(jī)體對化療的耐受程度,從而有望為提高大劑量化療在腫瘤治療中的應(yīng)用提供可靠保證。
[Abstract]:To investigate whether multidrug resistance gene (mdr1) can improve the tolerance of human placental derived mesenchymal stem cells (MSCs) to chemotherapeutic drugs, we isolated and amplified MSCs, from placenta tissue by perfusion and density gradient centrifugation. The retrovirus vector carrying mdr1 gene was transfected into 293T packaging cells by liposome transfection, and the virus supernatant was repeatedly infected with MSCs, through RT-PCR,. The integration and expression of mdr1 gene in the MSCs genome were detected by flow cytometry and immunofluorescence staining. The biological characteristics and multidirectional differentiation potential of transfected cells were also measured. Rhodamine excretion test was used to detect the functional activity of gene encoding product P-g170 and the tolerance of transfected MSCs to various chemotherapeutic drugs was determined by MTT method. On this basis, the bone marrow hematopoietic function injury model of nude mice was established by 緯-Co60 irradiation, and the protective effect of transfection MSCs on paclitaxel chemotherapy was studied. The results showed that mdr1 gene could be stably transfected and expressed in MSCs, and MSCs still accorded with the biological characteristics of stem cells. After gene transfection, P-g170 with functional activity could be expressed and showed typical multidrug resistance phenotype. In vivo transplantation of mdr1-MSCs could protect the peripheral blood and bone marrow cells of nude mice from chemotherapeutic effects. The results suggest that transfection of mdr1 gene into human placental derived MSCs by retroviral vector can obtain high efficient and stable expression of functional protein, and this transfection is safe and feasible for maintaining the stem cell characteristics of MSCs. In vivo transplantation with MSCs transfection can enhance the tolerance to chemotherapy, which is expected to provide a reliable guarantee for the application of high dose chemotherapy in tumor therapy.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2303440