發(fā)布時(shí)間：2018-10-30 19:21

【摘要】： 目的用體外實(shí)驗(yàn)研究CXC家族趨化因子I-TAC在小膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)及其影響因素,同時(shí)觀察I-TAC對(duì)原代T細(xì)胞的增殖、分化、黏附分子表達(dá)及趨化作用的影響,從而探討I-TAC在神經(jīng)系統(tǒng)退行性變中可能發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法用LPS刺激小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株N9,分別加入Aβ42、TNF-α、DEX以及特異性TLR4抗體,采用RT-PCR半定量分析檢測(cè)I-TAC mRNA的表達(dá),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR2、TLR4在N9表面的表達(dá)。用尼龍毛分離純化小鼠原代T細(xì)胞,加I-TAC培養(yǎng),用ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中的IFN-γ和IL-4濃度。采用微孔隔離室遷移實(shí)驗(yàn)觀察I-TAC對(duì)T細(xì)胞的趨化作用。原代T細(xì)胞及N9細(xì)胞在I-TAC刺激下的增殖實(shí)驗(yàn)采用MTT法。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黏附分子CD11a在T細(xì)胞表面的表達(dá)。 結(jié)果1、LPS與Aβ42均能誘導(dǎo)的N9細(xì)胞表達(dá)I-TAC mRNA;TNF-α能顯著增加LPS誘導(dǎo)的I-TAC mRNA表達(dá),DEX則降低其表達(dá)。 2、N9細(xì)胞在LPS刺激前后均可表達(dá)TLR2及TLR4膜分子。在細(xì)胞培養(yǎng)中加入抗-TLR4抗體,I-TAC的表達(dá)量顯著降低。 3、重組I-TAC對(duì)小鼠T細(xì)胞產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子IFN-γ的增加占顯著優(yōu)勢(shì)。在趨化實(shí)驗(yàn)中T細(xì)胞的遷移指數(shù)的增加呈I-TAC劑量依賴性,I-TAC濃度在200 ng/ml時(shí)遷移指數(shù)達(dá)4.964±1.398。在T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,I-TAC使OD值顯著增高;但在N9細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中I-TAC卻使OD值顯著下降。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)顯示I-TAC以劑量依賴的形式顯著增加CD11a(LAF-1)陽(yáng)性T細(xì)胞的百分比。 結(jié)論1、LPS、TNF-α、Aβ42能夠誘導(dǎo)N9細(xì)胞表達(dá)I-TAC mRNA,其中TNF-α對(duì)LPS的誘導(dǎo)作用具有協(xié)同效應(yīng),而DEX則具有拮抗效應(yīng)。 2、LPS促進(jìn)N9細(xì)胞表面表達(dá)TLR2、TLR4。TLR4介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)可能是I-TAC表達(dá)的重要依賴因素。 3、I-TAC能促進(jìn)T細(xì)胞趨化、增殖、表達(dá)黏附分子及向Th1方向分化。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of CXC family chemokine I-TAC in microglia and its influencing factors in vitro, and to observe the effects of I-TAC on the proliferation, differentiation, expression and chemotaxis of adhesion molecules in primary T cells. To explore the possible role of I-TAC in the immune regulation of neurodegenerative degeneration. Methods LPS was used to stimulate mouse microglia cell line N9, A 尾 42TNF- 偽, DEX and specific TLR4 antibody were added respectively. The expression of I-TAC mRNA was detected by RT-PCR semi-quantitative analysis, and the expression of TLR2,TLR4 on N9 surface was detected by flow cytometry. The primary T cells of mice were isolated and purified by nylon hair and cultured with I-TAC. The concentrations of IFN- 緯 and IL-4 in the supernatant were detected by ELISA. The chemotactic effect of I-TAC on T cells was observed by micropore isolation chamber migration experiment. The proliferation of primary T cells and N 9 cells stimulated by I-TAC was studied by MTT method. The expression of adhesion molecule CD11a on T cell surface was detected by flow cytometry. Results 1the expression of I-TAC mRNA;TNF- 偽 in N9 cells induced by both LPs and A 尾 42 could significantly increase the expression of I-TAC mRNA induced by LPS, while the expression of DEX decreased. 2 TLR2 and TLR4 membrane molecules could be expressed in N9 cells before and after LPS stimulation. When anti-TLR4 antibody was added into cell culture, the expression of I-TAC decreased significantly. 3Recombinant I-TAC had a significant advantage in increasing the production of Th1 type cytokine IFN- 緯 by T cells in mice. In chemotactic experiment, the migration index of T cells increased in a I-TAC dose-dependent manner, and the migration index of T cells reached 4.964 鹵1.398 at the concentration of I-TAC at 200 ng/ml. In T cell proliferation test, I-TAC significantly increased OD value compared with control group, but I-TAC significantly decreased OD value in N9 cell proliferation test. Flow cytometry showed that I-TAC significantly increased the percentage of CD11a (LAF-1) positive T cells in a dose-dependent manner. Conclusion 1LPS- 偽, A 尾 42 can induce the expression of I-TAC mRNA, in N9 cells. TNF- 偽 has synergistic effect on the induction of LPS, while DEX has antagonistic effect. 2 LPS-induced TLR2,TLR4.TLR4 mediated signal transduction on N9 cell surface may be an important dependent factor of I-TAC expression. 3I-TAC can promote T cell chemotaxis, proliferation, expression of adhesion molecules and differentiation towards Th1.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R741;R392

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8 本版編輯邋董怡 張p，

本文編號(hào)：2300926