【摘要】：背景:大多哺乳類細(xì)胞在正常生理狀態(tài)下多以三維結(jié)構(gòu)存在,為還原細(xì)胞本身在體內(nèi)的自然狀態(tài),很多研究者開始嘗試在體外對(duì)細(xì)胞進(jìn)行三維培養(yǎng),球形培養(yǎng)是一種常見的三維培養(yǎng)模式。目的:嘗試用3種不同的方法在體外對(duì)人脂肪干細(xì)胞進(jìn)行球形培養(yǎng),并觀察其生物學(xué)特征。方法:對(duì)提取的脂肪來源細(xì)胞進(jìn)行表面Marker流式檢測(cè)以及成脂成骨誘導(dǎo)鑒定后,證實(shí)為脂肪干細(xì)胞。先后用低黏附培養(yǎng)法、hanging-drop培養(yǎng)法和Eppendorf管培養(yǎng)法3種方法在體外對(duì)脂肪干細(xì)胞進(jìn)行球形培養(yǎng),對(duì)3種方法形成球形的特點(diǎn)進(jìn)行比較分析,并通過Imagej軟件計(jì)算出3組多細(xì)胞球體的平均面積,利用Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal LiveDead Cells試劑盒對(duì)3組多細(xì)胞球體進(jìn)行活力檢測(cè)。結(jié)果與結(jié)論:①通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表型標(biāo)志物,其中CD29,CD44,CD59完全陽性,同時(shí)成脂成骨誘導(dǎo)也為陽性,證實(shí)提取的細(xì)胞為脂肪干細(xì)胞。3代以內(nèi)脂肪干細(xì)胞多呈長(zhǎng)梭形,并克隆狀生長(zhǎng)。②低黏附培養(yǎng)法、hanging-drop培養(yǎng)法、Eppendorf管培養(yǎng)法均可使脂肪干細(xì)胞聚集成球形生長(zhǎng),但所成多細(xì)胞球形有所差異。低黏附培養(yǎng)法所形成的細(xì)胞球形大小不一,不易控制;而hanging-drop培養(yǎng)法和Eppendorf管培養(yǎng)法均可使脂肪干細(xì)胞形成大小均一的球形,但在大小和形成時(shí)間上有所不同。③3種不同方法所形成的球形細(xì)胞均保持較好的細(xì)胞活力。
[Abstract]:Background: most mammalian cells in normal physiological state exist in a three-dimensional structure. In order to reduce the natural state of the cells in vivo, many researchers began to try to culture the cells in vitro. Spherical culture is a common three-dimensional culture model. Aim: to study the biological characteristics of human adipose stem cells cultured in vitro with three different methods. Methods: the extracted adipose derived cells were confirmed as adipose stem cells by surface Marker flow detection and adipogenic osteogenesis induction. Three methods of low adhesion culture, hanging-drop culture and Eppendorf tube culture were used to culture adipose stem cells in vitro. The mean area of three groups of multicellular spheres was calculated by Imagej software, and the viability of the three groups of multicellular spheres was detected by Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal LiveDead Cells kit. Results and conclusion: 1 the phenotypic markers were identified by flow cytometry, in which CD29,CD44,CD59 was completely positive and adipogenic osteogenesis was positive, which confirmed that the extracted cells were adipose stem cells. 2 low adhesion culture method, hanging-drop culture method and Eppendorf tube culture method can make adipose stem cells aggregate into globular growth, but there are some differences in the formation of multicellular spheres. The spherical cells formed by low adhesion culture are different in size and difficult to control, but both hanging-drop culture and Eppendorf tube culture can make adipose stem cells to form uniform globules. However, the size and time of formation were different, and the spherical cells formed by 33 different methods kept good cell viability.
【作者單位】： 暨南大學(xué)再生醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院眼科研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“微重力介導(dǎo)角膜基質(zhì)細(xì)胞的iPS誘導(dǎo)及其角膜內(nèi)皮細(xì)胞分化(30973244)”~~
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2294398