發(fā)布時間：2018-10-21 08:28

【摘要】：目的采用漢遜酵母系統(tǒng)表達人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)31和33型L1蛋白類病毒顆粒(virus-like particles,VLPs),純化后檢測其免疫原性。方法將表達HPV31和HPV33 L1蛋白的重組漢遜酵母工程菌經(jīng)高密度發(fā)酵,收集菌體,進行高壓均質(zhì)破碎后,采用親和層析法純化HPV31和HPV33 L1 VLPs,SDS-PAGE和Western blot鑒定重組蛋白,透射電鏡觀察VLPs形態(tài),動態(tài)光散射儀分析VLPs粒徑大小及分布情況。將BALB/c小鼠隨機分為3組:HPV31 L1 VLP組(蛋白含量0.5μg,鋁含量0.24 mg)、HPV33 L1 VLP組(蛋白含量0.5μg,鋁含量0.24 mg)和佐劑對照組(鋁含量0.24 mg),分別于0、1、3周經(jīng)腹腔注射免疫小鼠,于每次免疫后1周經(jīng)眼球采血,分離血清,采用假病毒中和試驗檢測血清中和抗體滴度。結(jié)果純化的HPV31和HPV33 L1重組蛋白相對分子質(zhì)量約為56 000,可與HPV L1通用型單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合。經(jīng)透射電鏡及動態(tài)光散射觀察,可見VLPs形成,但部分L1蛋白以五聚體的殼粒形式存在,未包裝成顆粒。HPV31和33 L1 VLPs初次免疫后1周,即能誘導BALB/c小鼠產(chǎn)生較高滴度的血清中和抗體,且明顯高于佐劑對照組(P0.05),隨著免疫次數(shù)的增加,HPV31 L1 VLP組和HPV33 L1 VLP組免疫小鼠血清中和抗體滴度也相應增加。結(jié)論應用漢遜酵母可高效表達HPV31和HPV33 L1重組蛋白,并形成VLPs。用含鋁佐劑的重組蛋白免疫BALB/c小鼠,具有較好的免疫原性,可作為多價重組HPV疫苗的組分抗原。
[Abstract]:Objective to express human papillomavirus (human papillomavirus,HPV) 31 and 33 L1 protein like virus granules (virus-like particles,VLPs) by using Hansenomyces cerevisiae system and to detect their immunogenicity after purification. Methods Recombinant Hansenomyces cerevisiae expressing HPV31 and HPV33 L1 protein were fermented with high density and collected. After high pressure homogenization and fragmentation, HPV31, HPV33 L1 VLPs,SDS-PAGE and Western blot were purified by affinity chromatography. The morphology of VLPs was observed by transmission electron microscope. The particle size and distribution of VLPs were analyzed by dynamic light scattering instrument. BALB/c mice were randomly divided into three groups: HPV31 L1 VLP group (0.5 渭 g protein content, Al 0.24 mg), HPV33 L1 VLP group) and adjuvant control group (0.5 渭 g protein content, 0.24 mg), HPV33 L1 VLP group) and adjuvant control group (0.5 渭 g protein content, 0.24 mg), HPV33 L1 VLP group) and adjuvant control group (0.5 渭 g protein content and 0.24 mg), HPV33 L1 VLP group respectively). Blood samples were collected from eyeball one week after each immunization and serum was isolated. Serum neutralizing antibody titer was detected by pseudovirus neutralization test. Results the relative molecular weight of the purified HPV31 and HPV33 L1 recombinant proteins was about 56000, which could specifically bind to HPV L1 universal monoclonal antibody. The formation of VLPs was observed by transmission electron microscopy and dynamic light scattering, but some L1 proteins existed in the form of shell particles of pentamer and were not packaged into granules. HPV31 and 33 L1 VLPs were not packed into granules at 1 week after primary immunization. It could induce BALB/c mice to produce high titer neutralizing antibody, and it was significantly higher than that of adjuvant control group (P0.05). With the increase of immunization times, serum neutralization antibody titer of HPV31 L1 VLP group and HPV33 L1 VLP group increased accordingly. Conclusion the recombinant protein of HPV31 and HPV33 L1 can be expressed efficiently by using Hansenia cerevisiae and VLPs. can be formed. The recombinant protein containing aluminum adjuvant was used to immunize BALB/c mice with good immunogenicity and could be used as a component antigen of multivalent recombinant HPV vaccine.
【作者單位】： 北京生物制品研究所有限責任公司;北京天壇生物制品股份有限公司;
【基金】：863計劃重大專項(2012AA02A401)
【分類號】：R392-33

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