【摘要】：對生精細胞特異表達基因的功能界定將有利于揭示生精過程的生物學(xué)機理。由于體外細胞學(xué)研究方式的困難,研究者們積極地探索著體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染方法。然而以往大部分的基因轉(zhuǎn)染方法都傾向于轉(zhuǎn)染Sertoli細胞而非生精細胞。多聚乙酰亞胺(polyethylenimine,PEI)是新近發(fā)現(xiàn)的一種非病毒陽離子轉(zhuǎn)染介導(dǎo)劑,本研究探索了一個新的簡便而有效的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染方法:PEI介導(dǎo)的在體睪丸基因轉(zhuǎn)染。許多研究表明PEI有著比傳統(tǒng)的脂質(zhì)體更好的轉(zhuǎn)染特性,并且已被廣泛應(yīng)用于許多研究中,但還未在睪丸組織的轉(zhuǎn)基因研究中被研究過。本研究通過活體小鼠睪九輸出管注射技術(shù)將PEI/DNA(pEGFP-NYD-SP12或pEGFP質(zhì)粒)復(fù)合物導(dǎo)入生精小管,三天后冰凍切片,立即在熒光鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達,判斷轉(zhuǎn)染狀況。結(jié)果表明目的基因通過PEI的介導(dǎo)可以實現(xiàn)生精細胞的轉(zhuǎn)染,而Sertoli細胞無明顯被轉(zhuǎn)染跡象,且被轉(zhuǎn)染細胞大多為精母細胞。對于Sertoli細胞的陰性轉(zhuǎn)染結(jié)果,可能是由于Sertoli未被轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染后基因表達效率很低,沒有被檢測到,這還需進一步的實驗去驗證。將本研究前期克隆的新基因NYD-SP12通過以上方式轉(zhuǎn)入生精細胞。NYD-SP12基因是睪九特異表達基因,小鼠中原位雜交實驗表明其表達只限于生精上皮而不在間質(zhì)細胞中表達。在前期的體外細胞學(xué)實驗中證明NYS-SP12基因定位于高爾基體,因此我們推斷該基因可能參與了精子頂體的形成。本實驗
[Abstract]:The function definition of spermatogenic cell specific expression gene will be helpful to reveal the biological mechanism of spermatogenesis. Due to the difficulty of in vitro cytological research, researchers are actively exploring in vivo gene transfection methods. However, most of the previous gene transfection methods tend to transfect Sertoli cells rather than spermatogenic cells. Polyimide (polyethylenimine,PEI) is a newly discovered non-viral cationic transfection mediator. In this study, a new simple and effective method for gene transfection in vivo, PEI mediated gene transfection of testis in vivo, was explored. Many studies have shown that PEI has better transfection properties than traditional liposomes, and has been widely used in many studies, but has not been studied in the study of testicular tissue transgenic. In this study, PEI/DNA (pEGFP-NYD-SP12 or pEGFP plasmid) complexes were introduced into seminiferous tubules by injection of pEGFP-NYD-SP12 or pEGFP plasmid into seminiferous tubules. After 3 days, the expression of green fluorescent protein (GFP) was observed under fluorescence microscope, and the transfection status was evaluated. The results showed that the target gene could be transfected into spermatogenic cells by PEI, but the Sertoli cells showed no evidence of transfection, and most of the transfected cells were spermatocytes. The result of negative transfection of Sertoli cells may be due to the low efficiency of gene expression after Sertoli has not been transfected or transfected, which needs further experiments to verify. NYD-SP12, a new gene cloned in this study, was transferred into spermatogenic cells in the above way. NYD-SP12 gene is a specific gene expressed in testis. In situ hybridization in mice showed that the expression of NYD-SP12 gene was limited to spermatogenic epithelium but not in interstitial cells. In vitro cytological experiments showed that the NYS-SP12 gene was located in Golgi body, so we infer that the gene may be involved in the formation of acrosome in spermatozoa. This experiment
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R346

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 呂明德,鄭云,黃嘉凌,蕭定璋,李樹濃;B7-1和IL-12基因轉(zhuǎn)染對肝癌細胞免疫原性的影響[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2000年04期

2 陳寶安,朱梁軍,朱敏生,潘英,杜娟,陳蘇寧,王駿,邵澤葉;重組載體pLNCX/iNOS的構(gòu)建及其在NIH3T3細胞中滴度的測定[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年02期

3 陳傳好,韓卉,陳昌杰;大鼠失神經(jīng)支配表情肌NT-3基因轉(zhuǎn)染的實驗研究[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2004年02期

4 白曉峰,田衛(wèi)東,陳希哲,李志勇;人血管內(nèi)皮細胞生長因子165基因轉(zhuǎn)染大鼠骨髓基質(zhì)細胞的實驗研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年04期

5 尤長宣 ,羅榮城 ,蘇瑾 ,張軍一 ,廖旺軍 ,鄭航 ,Yong Liu ,Paul L Hermonat;BA46基因轉(zhuǎn)染樹突狀細胞治療乳腺癌的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年07期

6 顧正勤,許傳亮,高旭,孫穎浩,李云,沈茜;腺病毒介導(dǎo)hIL-2基因轉(zhuǎn)染膀胱上皮的體內(nèi)研究[J];臨床泌尿外科雜志;2005年11期

7 康春雨,章慶國;人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2真核表達質(zhì)粒的制備、轉(zhuǎn)染及表達[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2005年05期

8 陳云超;張青萍;David O.Cosgrove;Martin J K Blomley;;共聚物在超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染中的新功能[J];中華超聲影像學(xué)雜志;2005年11期

9 潘海濤;鄭啟新;楊述華;劉勇;;B7-1基因轉(zhuǎn)染對骨肉瘤細胞生物學(xué)行為的影響[J];中國癌癥雜志;2005年06期

10 趙欣;楊向軍;白霞;周玲;李紅霞;程緒杰;蔣彬;蔣文平;;脂質(zhì)體介導(dǎo)hHCN2基因轉(zhuǎn)染HEK293細胞[J];江蘇醫(yī)藥;2006年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王季石;胡秀英;方琴;謝建瓊;崔欣;;ALDH2基因轉(zhuǎn)染對白血病細胞增殖與凋亡的影響[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

2 李碩;王波林;余孝其;;用于基因轉(zhuǎn)染的可降解大環(huán)多胺聚合物的合成[A];大環(huán)化學(xué)和超分子化學(xué)的新發(fā)展——當前學(xué)科交叉的一個重要橋梁——中國化學(xué)會全國第十五屆大環(huán)化學(xué)暨第七屆超分子化學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2010年

3 賈向旭;張雪峰;袁麗珍;江國春;魯茁壯;魏康;;p21基因轉(zhuǎn)染提高了輻射抗性腫瘤細胞的輻射敏感性[A];中華醫(yī)學(xué)會放射醫(yī)學(xué)與防護學(xué)分會第二次中青年專題研討會論文匯編[C];1999年

4 趙永波;王楓;李鈺;;t-PA基因轉(zhuǎn)染AGZY83-a細胞移植入小鼠體內(nèi)的表達研究[A];第三屆全國少數(shù)民族地區(qū)神經(jīng)病學(xué)會論文匯編[C];2005年

5 張東山;劉伏友;陳香美;彭佑銘;;超聲微泡系統(tǒng)介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染大鼠腎臟的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

6 王書俠;陳芳芳;賈麗;趙曉琴;武建國;虞偉;李曉軍;;人分化抑制因子3在A549/DDP細胞中的表達及作用[A];全國臨床免疫檢驗研討會暨第六屆全國臨床免疫學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

7 賈赤宇;陳璧;;hTGFβ1基因轉(zhuǎn)染對NIH3T3成纖維細胞體外增殖的影響研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1997年

8 李瑋;譚建;方佩華;李寧;;人鈉碘轉(zhuǎn)運體基因轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞介導(dǎo)放射性碘治療的體外研究[A];第四屆中國核學(xué)會省市區(qū)“三核”論壇論文集[C];2007年

9 李慧武;戴\戎;湯亭亭;嚴孟寧;郁朝鋒;張曉玲;岳冰;樓覺人;;人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2基因轉(zhuǎn)染脂肪源性間充質(zhì)干細胞的成骨研究[A];2005年上海市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

10 郭亮;韓雅玲;閆承慧;郭鵬;鄧捷;麥曉燕;;腺病毒介導(dǎo)E1A激活基因阻遏子基因轉(zhuǎn)染抑制兔頸動脈球囊拉傷后新生內(nèi)膜形成[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 阿基 牛劍 余志平 張貴華 風(fēng)信 貴華 陸志城 朱明;生物療法又有新花樣[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

2 記者 王勇;重慶誕生世界首臺超聲婦科治療儀[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

3 張中橋;卵巢癌診治新進展[N];大眾衛(wèi)生報;2000年

4 通訊員 錢勇 記者 范又;我國成功重建永生化人臍靜脈內(nèi)皮細胞[N];光明日報;2003年

5 馮琳;我國毛囊生長調(diào)控研究步入國際先進水平[N];中國醫(yī)藥報;2001年

6 言誠;青蒿素作用機制 研究獲重大突破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

7 林均紅　徐蘭山;基因治療感覺神經(jīng)性耳聾在白豚鼠試驗中獲成果[N];科技日報;2010年

8 記者唐先武 特約記者錢勇;永生化人臍靜脈內(nèi)皮細胞重建成功[N];科技日報;2003年

9 記者 凌翔;中國海洋大學(xué)破解角膜組織領(lǐng)域國際性難題[N];光明日報;2010年

10 記者 蔣明　通訊員 王懷民;致腎小管細胞死亡的“兇手”有望被降伏[N];健康報;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 曹毅;用基因打靶技術(shù)構(gòu)建惡性瘧原蟲MSP1轉(zhuǎn)基因鼠瘧模型及其應(yīng)用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 梁日生;轉(zhuǎn)TrkC基因神經(jīng)干細胞移植治療脊髓損傷的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 張瑞芬;金屬硫蛋白與乳腺癌關(guān)系的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

4 周艷;乳腺癌ERβ表達的臨床意義及其與他莫昔芬治療耐藥相關(guān)意義的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

5 歐雅莉;GDNF基因修飾臍血細胞并血腦屏障開放劑對高血壓腦梗療效的實驗研究[D];中南大學(xué);2009年

6 李曉強;轉(zhuǎn)染VEGF165基因的內(nèi)皮祖細胞移植治療慢性深靜脈血栓的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2008年

7 汪圣毅;腺病毒介導(dǎo)hIL-10基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合IFN-γ抑制血管平滑肌細胞增殖及其機制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

8 高振南;人腫瘤壞死因子-a基因轉(zhuǎn)染對舌癌細胞生物學(xué)行為影響的實驗研究[D];四川大學(xué);2002年

9 宋飛;胞嘧啶脫氨酶基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞及治療腦膠質(zhì)瘤的實驗研究[D];大連理工大學(xué);2011年

10 劉勤;羥基磷灰石納米粒載體介導(dǎo)的大鼠肝細胞體內(nèi)外基因轉(zhuǎn)染實驗[D];中南大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陸麗;PEI介導(dǎo)的小鼠生精細胞基因轉(zhuǎn)染及其在NYD-SP12基因功能研究中的應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

2 許杰;TGF-β1轉(zhuǎn)基因牙齦成纖維細胞生物學(xué)特性及其胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 趙靜;脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白基因在骨髓基質(zhì)細胞內(nèi)表達[D];山東大學(xué);2005年

4 駱書美;超聲微泡介導(dǎo)pEGFP-N1轉(zhuǎn)染人牙齦成纖維細胞的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 姚珂;反義PNA抑制端粒酶活性對肺癌A549細胞影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 梁政;rAAV/AFP轉(zhuǎn)染對人外周血單核細胞來源樹突狀細胞免疫刺激功能研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 林桂渺;TIMP-3真核表達載體構(gòu)建以及在前列腺癌細胞株中作用的研究[D];吉林大學(xué);2006年

8 種瑞峰;p21~（waf1）基因轉(zhuǎn)染對乳腺癌細胞增殖活性和中心體復(fù)制的影響[D];青島大學(xué);2008年

9 林霞;納米基因載體酶切保護機理的研究及新型基因載體的制備與應(yīng)用[D];湖南大學(xué);2005年

10 孫書軍;溫度敏感殼聚糖—接枝-NIPAAm/VL共聚物轉(zhuǎn)基因載體[D];天津大學(xué);2005年

，

本文編號：2283113