【摘要】：對生精細胞特異表達基因的功能界定將有利于揭示生精過程的生物學機理。由于體外細胞學研究方式的困難,研究者們積極地探索著體內基因轉染方法。然而以往大部分的基因轉染方法都傾向于轉染Sertoli細胞而非生精細胞。多聚乙酰亞胺(polyethylenimine,PEI)是新近發(fā)現(xiàn)的一種非病毒陽離子轉染介導劑,本研究探索了一個新的簡便而有效的體內基因轉染方法:PEI介導的在體睪丸基因轉染。許多研究表明PEI有著比傳統(tǒng)的脂質體更好的轉染特性,并且已被廣泛應用于許多研究中,但還未在睪丸組織的轉基因研究中被研究過。本研究通過活體小鼠睪九輸出管注射技術將PEI/DNA(pEGFP-NYD-SP12或pEGFP質粒)復合物導入生精小管,三天后冰凍切片,立即在熒光鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達,判斷轉染狀況。結果表明目的基因通過PEI的介導可以實現(xiàn)生精細胞的轉染,而Sertoli細胞無明顯被轉染跡象,且被轉染細胞大多為精母細胞。對于Sertoli細胞的陰性轉染結果,可能是由于Sertoli未被轉染或轉染后基因表達效率很低,沒有被檢測到,這還需進一步的實驗去驗證。將本研究前期克隆的新基因NYD-SP12通過以上方式轉入生精細胞。NYD-SP12基因是睪九特異表達基因,小鼠中原位雜交實驗表明其表達只限于生精上皮而不在間質細胞中表達。在前期的體外細胞學實驗中證明NYS-SP12基因定位于高爾基體,因此我們推斷該基因可能參與了精子頂體的形成。本實驗
[Abstract]:The function definition of spermatogenic cell specific expression gene will be helpful to reveal the biological mechanism of spermatogenesis. Due to the difficulty of in vitro cytological research, researchers are actively exploring in vivo gene transfection methods. However, most of the previous gene transfection methods tend to transfect Sertoli cells rather than spermatogenic cells. Polyimide (polyethylenimine,PEI) is a newly discovered non-viral cationic transfection mediator. In this study, a new simple and effective method for gene transfection in vivo, PEI mediated gene transfection of testis in vivo, was explored. Many studies have shown that PEI has better transfection properties than traditional liposomes, and has been widely used in many studies, but has not been studied in the study of testicular tissue transgenic. In this study, PEI/DNA (pEGFP-NYD-SP12 or pEGFP plasmid) complexes were introduced into seminiferous tubules by injection of pEGFP-NYD-SP12 or pEGFP plasmid into seminiferous tubules. After 3 days, the expression of green fluorescent protein (GFP) was observed under fluorescence microscope, and the transfection status was evaluated. The results showed that the target gene could be transfected into spermatogenic cells by PEI, but the Sertoli cells showed no evidence of transfection, and most of the transfected cells were spermatocytes. The result of negative transfection of Sertoli cells may be due to the low efficiency of gene expression after Sertoli has not been transfected or transfected, which needs further experiments to verify. NYD-SP12, a new gene cloned in this study, was transferred into spermatogenic cells in the above way. NYD-SP12 gene is a specific gene expressed in testis. In situ hybridization in mice showed that the expression of NYD-SP12 gene was limited to spermatogenic epithelium but not in interstitial cells. In vitro cytological experiments showed that the NYS-SP12 gene was located in Golgi body, so we infer that the gene may be involved in the formation of acrosome in spermatozoa. This experiment
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

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本文編號：2283113