【摘要】：目的 建立一種體外誘導(dǎo)、培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)成軟骨組織的方法;檢驗(yàn)Ⅰ型膠原凝膠作為軟骨組織工程載體的可行性;探討以人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為種子細(xì)胞、Ⅰ型膠原凝膠為載體的軟骨組織工程的最佳細(xì)胞密度和最佳培養(yǎng)時(shí)間。 方法 分別采集6例健康成人骨髓6ml,用全骨髓培養(yǎng)法進(jìn)行分離,在含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴(kuò)增,倒置顯微鏡下,觀察BMSCs在體外單層培養(yǎng)條件下的形態(tài)、特征和細(xì)胞生長(zhǎng)的狀況。將培養(yǎng)第三代的BMSCs消化并收集,與Ⅰ型膠原凝膠結(jié)合。按照不同的結(jié)合密度分為4組:A組為1×10~4/ml,B組為1×10~5/ml,C組1×10~6/ml,D組為5×10~6/ml。A、B、C、D組均用含10%胎牛血清的誘導(dǎo)培養(yǎng)基(含10ng/ml的rh TGF-β_1、丙酮酸鈉1mM、地塞米松10~(-7)M、牛胰島素6.25ug/ml、轉(zhuǎn)鐵蛋白6.25ug/ml的高糖DMEM培養(yǎng)基)進(jìn)行誘導(dǎo)。于誘導(dǎo)培養(yǎng)后第2周,分別取各組細(xì)胞-Ⅰ型膠原凝膠盤(pán),行免疫組化檢測(cè)Ⅱ型膠原的分泌,原位雜交定性分析Ⅱ型膠原mRNA表達(dá),甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)蛋白多糖。于2、3、4、5周采用酶標(biāo)染色法定量測(cè)量蛋白多糖(GAG)的含量。 結(jié)果 經(jīng)過(guò)全骨髓培養(yǎng)法可以得到形態(tài)均一的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞貼壁后呈長(zhǎng)梭型,約3-4周后細(xì)胞可鋪滿(mǎn),傳代培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛。B(1×10~5/ml)、C(1×10~6/ml)、D(5×10~6/ml)組在誘導(dǎo)培養(yǎng)2周之后,Ⅱ型膠原免疫組化均為陽(yáng)性,原位雜交可以檢測(cè)到Ⅱ型膠原mRNA的表達(dá),甲苯胺藍(lán)染色陽(yáng)性,均可以測(cè)出不同含量的GAG。而A組(1×10~4/ml)上述指標(biāo)均為陰性。對(duì)不同組GAG含量的比較,為D(5×10~6/ml)C(1×10~6/ml)B(1×10~5/ml)組;其中各組不同時(shí)間的橫向比較,4周3周2周,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差別(P0.05)。而第5周與第4周比較,無(wú)
[Abstract]:Objective to establish a method for inducing human bone marrow mesenchymal stem cells (Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs) into chondrogenic tissue in vitro, and to test the feasibility of collagen type 鈪，

本文編號(hào)：2272528