【摘要】：目的 建立一種體外誘導、培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)成軟骨組織的方法;檢驗Ⅰ型膠原凝膠作為軟骨組織工程載體的可行性;探討以人骨髓間充質干細胞為種子細胞、Ⅰ型膠原凝膠為載體的軟骨組織工程的最佳細胞密度和最佳培養(yǎng)時間。 方法 分別采集6例健康成人骨髓6ml,用全骨髓培養(yǎng)法進行分離,在含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增,倒置顯微鏡下,觀察BMSCs在體外單層培養(yǎng)條件下的形態(tài)、特征和細胞生長的狀況。將培養(yǎng)第三代的BMSCs消化并收集,與Ⅰ型膠原凝膠結合。按照不同的結合密度分為4組:A組為1×10~4/ml,B組為1×10~5/ml,C組1×10~6/ml,D組為5×10~6/ml。A、B、C、D組均用含10%胎牛血清的誘導培養(yǎng)基(含10ng/ml的rh TGF-β_1、丙酮酸鈉1mM、地塞米松10~(-7)M、牛胰島素6.25ug/ml、轉鐵蛋白6.25ug/ml的高糖DMEM培養(yǎng)基)進行誘導。于誘導培養(yǎng)后第2周,分別取各組細胞-Ⅰ型膠原凝膠盤,行免疫組化檢測Ⅱ型膠原的分泌,原位雜交定性分析Ⅱ型膠原mRNA表達,甲苯胺藍染色檢測蛋白多糖。于2、3、4、5周采用酶標染色法定量測量蛋白多糖(GAG)的含量。 結果 經過全骨髓培養(yǎng)法可以得到形態(tài)均一的骨髓間充質干細胞,細胞貼壁后呈長梭型,約3-4周后細胞可鋪滿,傳代培養(yǎng)細胞生長旺盛。B(1×10~5/ml)、C(1×10~6/ml)、D(5×10~6/ml)組在誘導培養(yǎng)2周之后,Ⅱ型膠原免疫組化均為陽性,原位雜交可以檢測到Ⅱ型膠原mRNA的表達,甲苯胺藍染色陽性,均可以測出不同含量的GAG。而A組(1×10~4/ml)上述指標均為陰性。對不同組GAG含量的比較,為D(5×10~6/ml)C(1×10~6/ml)B(1×10~5/ml)組;其中各組不同時間的橫向比較,4周3周2周,有統(tǒng)計學意義上的差別(P0.05)。而第5周與第4周比較,無
[Abstract]:Objective to establish a method for inducing human bone marrow mesenchymal stem cells (Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs) into chondrogenic tissue in vitro, and to test the feasibility of collagen type 鈪，

本文編號：2272528