【摘要】： 目的 1．對(duì)臍血中有核紅細(xì)胞性狀進(jìn)行研究，探討從孕婦外周血中富集胎兒有核紅細(xì)胞的有效方法，為進(jìn)行無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前診斷提供科學(xué)依據(jù)。 2．探討利用孕婦尿液中游離DNA進(jìn)行性連鎖遺傳病產(chǎn)前診斷的可行性研究。 方法 1．對(duì)臍血進(jìn)行液體、半固體培養(yǎng)，以期獲得臍血中胎兒有核紅細(xì)胞(Fetal Nuclear Red Blood Cells，F(xiàn)NRBC)進(jìn)行細(xì)胞基本性狀研究；用聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene Difluoride，PVDF)膜對(duì)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞進(jìn)行分離；臍血單個(gè)核細(xì)胞微環(huán)境改變對(duì)PVDF膜富集胎兒有核紅細(xì)胞效率的影響。 2．將42例孕婦尿液進(jìn)行離心富集后提取游離DNA作為模板，以Y染色體短臂上的特異序列(SRY基因)為擴(kuò)增對(duì)象，用套式聚合酶鏈反應(yīng)(Nested-PCR)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析。 結(jié)果 1．聯(lián)苯胺染色和K-B染色法都能夠?qū)RBC同其他單個(gè)核細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)，而K-B染色可以進(jìn)一步將NRBC和FNRBC進(jìn)行區(qū)分；71份樣本中NRBC的占有比例不均，范圍在1％～54％，平均在8％左右；臍血的液體培養(yǎng)經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，得率最大為20％，細(xì)胞培養(yǎng)效果有待探討。 2．在檢測(cè)的42例孕婦尿液中32例孕婦尿液中檢出SRY基因片段，與其相對(duì)應(yīng)的血漿及血細(xì)胞亦檢出SRY基因片段。10例未檢出SRY基因片段，，與其相對(duì)應(yīng)的血漿及血細(xì)胞也未檢出SRY基因片段。 結(jié)論 1．聚偏二氟乙烯膜可用來(lái)分離臍血中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、紅細(xì)胞。臍血中單個(gè)核細(xì)胞微環(huán)境的改變可以提高有核紅細(xì)胞通過(guò)聚偏二氟乙烯膜的效率， 2．孕婦尿液中確實(shí)存在胎兒游離DNA，經(jīng)富集提取DNA，通過(guò)套式PCR法進(jìn)行胎兒性別判定，為非侵入性早期產(chǎn)前診斷性連鎖遺傳病及其它疾病奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective 1. To study the characteristics of nucleated red blood cells in umbilical cord blood, and to explore an effective method for enriching fetal nucleated red blood cells from maternal peripheral blood. To provide scientific basis for noninvasive prenatal diagnosis. 2. To explore the feasibility of prenatal diagnosis of progressive DNA in pregnant women's urine. Methods 1. Umbilical cord blood was cultured in liquid and semisolid medium to obtain fetal nucleated red blood cell (Fetal Nuclear Red Blood Cells,FNRBC). Lymphocytes, monocytes and nucleated erythrocytes were separated by polyvinylidene fluoride (Polyvinylidene Difluoride,PVDF) membrane. Effects of changes in microenvironment of umbilical cord blood mononuclear cells on the efficiency of PVDF membrane enrichment of fetal nucleated red blood cells. 2. Free DNA was extracted from urine of 42 pregnant women after centrifugation. The specific sequence on the short arm of Y chromosome (SRY gene) was amplified by nested polymerase chain reaction (Nested-PCR). The product was analyzed by agarose gel electrophoresis. Results 1. Both benzidine staining and K-B staining could distinguish NRBC from other mononuclear cells, but K-B staining could further distinguish NRBC from FNRBC. The proportion of NRBC in 71 samples was uneven, ranging from 1 to 54, with an average of about 8%. The effect of cell culture needs to be explored. 2. SRY gene fragment was detected in urine of 32 pregnant women out of 42 pregnant women. SRY gene fragments were also detected in plasma and blood cells, and SRY gene fragments were not detected in 10 cases and SRY gene fragments were not detected in corresponding plasma and blood cells. Poly (vinylidene fluoride) membrane can be used to isolate lymphocytes, monocytes, nucleated erythrocytes and erythrocytes from cord blood. The change of microenvironment of mononuclear cells in umbilical cord blood can improve the efficiency of nucleated erythrocytes passing through polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane. 2. Fetal migration does exist in pregnant women's urine. Extracted DNA, from isolated DNA, by nested PCR method was used to determine the sex of fetus. It lays a foundation for non-invasive early prenatal diagnosis of genetic linkage disease and other diseases.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2263454