【摘要】： 目的 1．對臍血中有核紅細(xì)胞性狀進(jìn)行研究，探討從孕婦外周血中富集胎兒有核紅細(xì)胞的有效方法，為進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷提供科學(xué)依據(jù)。 2．探討利用孕婦尿液中游離DNA進(jìn)行性連鎖遺傳病產(chǎn)前診斷的可行性研究。 方法 1．對臍血進(jìn)行液體、半固體培養(yǎng)，以期獲得臍血中胎兒有核紅細(xì)胞(Fetal Nuclear Red Blood Cells，F(xiàn)NRBC)進(jìn)行細(xì)胞基本性狀研究；用聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene Difluoride，PVDF)膜對淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞進(jìn)行分離；臍血單個(gè)核細(xì)胞微環(huán)境改變對PVDF膜富集胎兒有核紅細(xì)胞效率的影響。 2．將42例孕婦尿液進(jìn)行離心富集后提取游離DNA作為模板，以Y染色體短臂上的特異序列(SRY基因)為擴(kuò)增對象，用套式聚合酶鏈反應(yīng)(Nested-PCR)技術(shù)對其進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析。 結(jié)果 1．聯(lián)苯胺染色和K-B染色法都能夠?qū)RBC同其他單個(gè)核細(xì)胞區(qū)分開來，而K-B染色可以進(jìn)一步將NRBC和FNRBC進(jìn)行區(qū)分；71份樣本中NRBC的占有比例不均，范圍在1％～54％，平均在8％左右；臍血的液體培養(yǎng)經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，得率最大為20％，細(xì)胞培養(yǎng)效果有待探討。 2．在檢測的42例孕婦尿液中32例孕婦尿液中檢出SRY基因片段，與其相對應(yīng)的血漿及血細(xì)胞亦檢出SRY基因片段。10例未檢出SRY基因片段，，與其相對應(yīng)的血漿及血細(xì)胞也未檢出SRY基因片段。 結(jié)論 1．聚偏二氟乙烯膜可用來分離臍血中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、紅細(xì)胞。臍血中單個(gè)核細(xì)胞微環(huán)境的改變可以提高有核紅細(xì)胞通過聚偏二氟乙烯膜的效率， 2．孕婦尿液中確實(shí)存在胎兒游離DNA，經(jīng)富集提取DNA，通過套式PCR法進(jìn)行胎兒性別判定，為非侵入性早期產(chǎn)前診斷性連鎖遺傳病及其它疾病奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective 1. To study the characteristics of nucleated red blood cells in umbilical cord blood, and to explore an effective method for enriching fetal nucleated red blood cells from maternal peripheral blood. To provide scientific basis for noninvasive prenatal diagnosis. 2. To explore the feasibility of prenatal diagnosis of progressive DNA in pregnant women's urine. Methods 1. Umbilical cord blood was cultured in liquid and semisolid medium to obtain fetal nucleated red blood cell (Fetal Nuclear Red Blood Cells,FNRBC). Lymphocytes, monocytes and nucleated erythrocytes were separated by polyvinylidene fluoride (Polyvinylidene Difluoride,PVDF) membrane. Effects of changes in microenvironment of umbilical cord blood mononuclear cells on the efficiency of PVDF membrane enrichment of fetal nucleated red blood cells. 2. Free DNA was extracted from urine of 42 pregnant women after centrifugation. The specific sequence on the short arm of Y chromosome (SRY gene) was amplified by nested polymerase chain reaction (Nested-PCR). The product was analyzed by agarose gel electrophoresis. Results 1. Both benzidine staining and K-B staining could distinguish NRBC from other mononuclear cells, but K-B staining could further distinguish NRBC from FNRBC. The proportion of NRBC in 71 samples was uneven, ranging from 1 to 54, with an average of about 8%. The effect of cell culture needs to be explored. 2. SRY gene fragment was detected in urine of 32 pregnant women out of 42 pregnant women. SRY gene fragments were also detected in plasma and blood cells, and SRY gene fragments were not detected in 10 cases and SRY gene fragments were not detected in corresponding plasma and blood cells. Poly (vinylidene fluoride) membrane can be used to isolate lymphocytes, monocytes, nucleated erythrocytes and erythrocytes from cord blood. The change of microenvironment of mononuclear cells in umbilical cord blood can improve the efficiency of nucleated erythrocytes passing through polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane. 2. Fetal migration does exist in pregnant women's urine. Extracted DNA, from isolated DNA, by nested PCR method was used to determine the sex of fetus. It lays a foundation for non-invasive early prenatal diagnosis of genetic linkage disease and other diseases.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭桂琴;聶李平;巫世娟;李佳倪;孫波;金愛紅;丘海燕;;孕婦外周血分離胎兒有核紅細(xì)胞與FISH分析技術(shù)在無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J];中國婦幼保健;2007年31期

2 羅欣;杜穎穎;張進(jìn);馬端;;密度梯度離心和免疫磁珠分選相結(jié)合分離臍血中胎兒有核紅細(xì)胞[J];中國產(chǎn)前診斷雜志(電子版);2010年03期

3 朱明輝;培養(yǎng)孕母血中胎兒有核紅細(xì)胞作為無創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷的評(píng)價(jià)[J];國外醫(yī)學(xué).計(jì)劃生育分冊;1999年04期

4 李小波,秦蓁子,丁顯平;孕婦外周血中分離胎兒細(xì)胞及應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊;2005年07期

5 鄔晉芳;利用孕婦外周血胎兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷的研究[J];臨床薈萃;1999年17期

6 徐曉燕;陳漢平;相文佩;張銘;蔣榮珍;沈紅玲;郭玉珍;;利用3種抗體流式分選母血中胎兒細(xì)胞的比較[J];中國婦幼保健;2007年04期

7 馬建鴻;非侵入性產(chǎn)前診斷方法的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).婦幼保健分冊;2001年04期

8 張艷,遲洪濱;孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞的富集與純化及其在非侵入性產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;2001年05期

9 張銘;陳漢平;徐曉燕;郭鈺珍;沈紅玲;;兩種遺傳標(biāo)記系統(tǒng)鑒定母血中有核紅細(xì)胞來源[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2006年01期

10 任景慧;趙躍宏;徐宏里;林琳華;劉俞;李富榮;王新根;宋蘭林;;應(yīng)用磁激活細(xì)胞分選法從母血中分離胎兒有核紅細(xì)胞做FISH行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的研究[J];中國婦幼保健;2006年19期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳冬;葛艷芬;林婷;葉聯(lián)珍;鄭有為;;如何提高重型β地中海貧血在產(chǎn)前診斷中的準(zhǔn)確率[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

2 張靜引;孫麗洲;肖云山;;改良熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[A];第四屆長三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 王靜敏;吳曄;顧強(qiáng);趙海娟;尚晶;趙璐;王慧芳;楊艷玲;方方;秦炯;吳希如;姜玉武;;佩梅病PLP1基因突變分析與5例產(chǎn)前診斷[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

4 廖燦;鐘燕芳;李秋明;馬小燕;;經(jīng)腹臍靜脈穿刺術(shù)產(chǎn)前診斷2151例分析[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)專輯[C];2003年

5 李曉僑;姚鳳霞;孟巖;王錚;彭園園;佃艷;周青;蘇亮;黃尚志;;成人型多囊腎家系基因突變鑒定及產(chǎn)前診斷[A];第八次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議(中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會(huì))論文摘要匯編[C];2009年

6 馮翠竹;馬繼東;葉蓁蓁;馬麗霜;;十二指腸梗阻的產(chǎn)前診斷、圍產(chǎn)期管理與治療[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會(huì)論文集[C];2010年

7 宋杰;李守柔;黃冰玉;何為公;;孕婦外周血胎兒細(xì)胞的富集及在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[A];’96全國優(yōu)生科學(xué)大會(huì)大會(huì)學(xué)術(shù)講演與大會(huì)論文摘要匯編[C];1996年

8 許爭峰;胡婭莉;朱瑞芳;;高效羊水細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行臨床產(chǎn)前診斷979例[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 鐘燕芳;廖燦;龔惠芳;潘敏;李堅(jiān);鐘惠珠;黎麗仙;;妊娠婦女TORCH酶聯(lián)免疫法篩查及產(chǎn)前診斷[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)專輯[C];2003年

10 沈國松;張u&;何平亞;方嶸;;FISH技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值研究[A];2011年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 馬秀杰 李湛;產(chǎn)前診斷攔截“缺陷兒”[N];撫順日報(bào);2009年

2 李春;產(chǎn)前診斷出現(xiàn)曙光[N];福建科技報(bào);2000年

3 金永紅;產(chǎn)前診斷不能再隨意而為[N];健康報(bào);2003年

4 記者王丹;我國建成快速產(chǎn)前診斷技術(shù)體系[N];健康報(bào);2009年

5 衣曉峰　記者 劉傳江;產(chǎn)前診斷檔案要保存50年[N];中國消費(fèi)者報(bào);2009年

6 本報(bào)記者 鄧益輝　見習(xí)記者 衛(wèi)霞;血友病家庭產(chǎn)前診斷之痛[N];民主與法制時(shí)報(bào);2011年

7 通訊員 李化　許守年 記者 張啟軍;吉林將全面實(shí)施產(chǎn)前診斷篩查[N];健康報(bào);2009年

8 本報(bào)記者 任荃;產(chǎn)前診斷缺位“生”出遺憾[N];文匯報(bào);2008年

9 本報(bào)記者 周映夏;做好產(chǎn)前診斷生個(gè)健康寶寶[N];中山日報(bào);2009年

10 劉正英;產(chǎn)前診斷保平安[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 隋玉杰;基于生物納米技術(shù)從孕婦外周血分選FNRBC進(jìn)行唐氏綜合征診斷方法的研究[D];吉林大學(xué);2011年

2 周琳;胺碘酮對大鼠肥厚心室肌細(xì)胞離子流的急性及慢性作用研究[D];蘇州大學(xué);2005年

3 彭彥輝;膜通道蛋白與植物對滲透脅迫的響應(yīng)[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

4 朱前勇;無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷遺傳性疾病的生物芯片的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 樊建剛;小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的電生理學(xué)研究及順鉑對其鉀電流的影響[D];四川大學(xué);2004年

6 劉俊濤;侵入性產(chǎn)前診斷技術(shù)的系列評(píng)估[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 金華;遺傳性并多指家系的致病基因分析及產(chǎn)前診斷[D];山東大學(xué);2012年

8 李享元;基于離子通道動(dòng)力學(xué)的神經(jīng)藥物作用機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2005年

9 蘇曉通;shRNA沉默人肝癌細(xì)胞株SK-Hep1 Kir6.2基因的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 文磊;新芋螺毒素SO-3鎮(zhèn)痛作用的離子通道機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐向紅;微環(huán)境的改變對富集有核紅細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2007年

2 水麗君;利用母血中胎兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的研究[D];華中科技大學(xué);2009年

3 水麗君;利用母血中胎兒有核紅細(xì)胞進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的研究[D];華中科技大學(xué);2009年

4 方樸;孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞的富集[D];江西醫(yī)學(xué)院;2001年

5 杜迎亭;磁性納米復(fù)合粒子富集胎兒細(xì)胞在無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷唐氏綜合癥中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2011年

6 張榮;利用孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

7 任宇珂;頻譜染色體核型分析技術(shù)體系的建立及其在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2005年

8 施蕊;產(chǎn)前診斷偏誤之民事賠償責(zé)任研析[D];重慶大學(xué);2008年

9 王瑩;孕早中期唐氏綜合征篩查及297例介入產(chǎn)前診斷數(shù)據(jù)的分析[D];暨南大學(xué);2010年

10 苗明珠;雜合型單核苷酸多態(tài)性定量焦測序分析技術(shù)在唐氏綜合征快速產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2263454