【摘要】： 小劑量的內(nèi)毒素預(yù)處理后的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對(duì)LPS再次刺激的反應(yīng)性明顯降低,表現(xiàn)為炎癥因子的分泌減少;而且能提高小鼠在致死劑量?jī)?nèi)毒素再次刺激后的存活率,即內(nèi)毒素耐受現(xiàn)象。自從證實(shí)TLR (Toll-like receptor) 4是LPS的信號(hào)受體以來,內(nèi)毒素耐受的研究主要集中于信號(hào)受體和TLR4胞內(nèi)信號(hào)分子的變化�；蚯贸囼�(yàn)證實(shí)SR-A(macrophage scavenger receptor A)能通過調(diào)理素非依賴的方式吞噬細(xì)菌,從而提高小鼠對(duì)病原體攻擊的抵抗能力,然而SR-A是否同樣參與內(nèi)毒素目前還不清楚。我們發(fā)現(xiàn)LPS能以劑量和時(shí)間依賴的方式誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A,這與RAW264.7對(duì)LPS的再次刺激后分泌的炎癥因子(TNF-α和IL-6)減少之間有著很好的相關(guān)性。過量表達(dá)或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SR-A能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎癥因子或活化NF-κB,說明LPS誘導(dǎo)上調(diào)的SR-A參與了內(nèi)毒素耐受。另外,LPS能增強(qiáng)RAW264.7對(duì)FITC-LPS的結(jié)合和吞噬,但是能被清道夫受體SR配體Fucoidan和抗SR-A抗體2F8特異地抑制,提示RAW264.7結(jié)合和吞噬FITC-LPS的SR-A受體特異性。過量表達(dá)或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SR-A?1-49也同樣能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎癥因子或活化NF-κB,提示SR-A介導(dǎo)的RAW264.7對(duì)FITC-LPS的結(jié)合也能一定程度上抑制炎癥反應(yīng)。雖然,TLR4是LPS的信號(hào)受體,但是TLR4/MD-2抗體抑制TLR4信號(hào)后并不能抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A。然而,p38特異性抑制劑SB203580卻能完全抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A。因此,p38,而不是TLR4,依賴的SR-A上調(diào)可能通過結(jié)合或吞噬LPS參與RAW264.7細(xì)胞內(nèi)毒素耐受的形成。 已知sLPS(來源于Sigma的Escherichia coli O111:B4 LPS)能誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A,但是許多商品化LPS,包括我們所用的sLPS,通常含有TLR4和TLR2兩種激動(dòng)劑,有關(guān)它們?cè)谡T導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A中的相對(duì)作用目前還不清楚。熒光素酶試驗(yàn)證實(shí)我們所用的sLPS確實(shí)具有活化TLR4和TLR2兩種活性,但是重新純化去除TLR2激動(dòng)劑或用多粘霉素(PmB)特異中和TLR4激動(dòng)劑后的sLPS均只能微弱地誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A,但是等量的uLPS(re-extracted sLPS)和Pam3CSK4混合物卻能協(xié)同地誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A,而對(duì)TLR2和TLR4受體的表達(dá)沒有協(xié)同作用。雖然,
[Abstract]:The reactivity of monocytes and macrophages pretreated with small doses of endotoxin to LPS restimulation was significantly decreased, showing that the secretion of inflammatory factors was decreased, and the survival rate of mice was improved after the lethal dose of endotoxin was stimulated again. The phenomenon of endotoxin tolerance. Since it was confirmed that TLR (Toll-like receptor) 4 is the signal receptor of LPS, the study of endotoxin tolerance mainly focuses on the changes of signal receptors and intracellular signal molecules of TLR4. Gene knockout test confirmed that SR-A (macrophage scavenger receptor A) could phagocystify bacteria in a non-dependent manner, thus enhancing the ability of mice to resist pathogen attack. However, it is not clear whether SR-A is involved in endotoxin. We found that LPS can induce the expression of SR-A, in RAW264.7 in a dose-and time-dependent manner, which has a good correlation with the decrease of TNF- 偽 and IL-6 secreted by RAW264.7 after the restimulation of LPS. Overexpression or transient transfection of SR-A could inhibit the secretion of inflammatory factors or activate NF- 魏 B in RAW264.7 stimulated by LPS, suggesting that the up-regulated SR-A induced by LPS was involved in endotoxin tolerance. In addition, lipopolysaccharide could enhance the binding and phagocytosis of RAW264.7 to FITC-LPS, but could be specifically inhibited by scavenger receptor SR ligand Fucoidan and anti-SR-A antibody 2F8, suggesting that RAW264.7 binding and phagocytosis of FITC-LPS SR-A receptor were specific. Overexpression or transient transfection of SR-A?1-49 could also inhibit the secretion of inflammatory factors or activation of NF- 魏 B in RAW264.7 stimulated by LPS, suggesting that SR-A mediated RAW264.7 binding to FITC-LPS could also inhibit the inflammatory response to some extent. Although TLR4 is the signal receptor of LPS, TLR4/MD-2 antibody can not inhibit the expression of SR-A. in RAW264.7 induced by LPS after inhibiting TLR4 signal. However, SB203580, a specific inhibitor of p38, could completely inhibit the expression of SR-A. by RAW264.7 induced by LPS. Therefore, the up-regulation of p38, not TLR4, dependent SR-A, may be involved in the formation of endotoxin tolerance in RAW264.7 cells by binding or phagocytosis of LPS. It is known that sLPS (Escherichia coli O111:B4 LPS derived from Sigma) can induce RAW264.7 to express SR-A,. However, many commercial LPS, including the sLPS, we use, usually contain two agonists, TLR4 and TLR2, and the relative role of these two agonists in inducing RAW264.7 expression SR-A is still unknown. Luciferase tests confirmed that the sLPS we used did have activated TLR4 and TLR2 activities. However, the repurification of sLPS after removal of TLR2 agonist or specific neutralization of TLR4 agonist with polymycin (PmB) could only slightly induce RAW264.7 to express SR-A, but the same amount of uLPS (re-extracted sLPS) and Pam3CSK4 mixture could co-induce RAW264.7 to express SR-A, and to TLR2 and TLR4. There is no synergism in the expression of receptors. although
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2246592