【摘要】： 目的 通過(guò)人臍血樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)的體外培養(yǎng),對(duì)DC進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察及免疫表型檢測(cè),探討其對(duì)抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞CTL活性的影響。 方法 本研究首先在無(wú)菌條件下常規(guī)采集臍血,用淋巴細(xì)胞分離液分離臍血單個(gè)核細(xì)胞(cord blood mononuclear cell,CMNC)。將獲得的單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cell,MNC)分為7組,每組加入3ml的RPMI-1640培養(yǎng)基,分別添加不同的細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)DC的生成。其中一組為對(duì)照組,不加任何細(xì)胞因子培養(yǎng);另外6組分別添加rhIL-4和rhGM-CSF,其中3組在第五天再分別添加TNF-α。14d后,收集貼壁DC細(xì)胞,分別用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD83、CD86、CD14、HLA-DR等免疫表型。用MTT比色法檢測(cè)DC活化的T細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞(異基因的淋巴細(xì)胞組)對(duì)人紅白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞的殺傷作用。 結(jié)果 7組CMNC培養(yǎng)14天后,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)貼壁細(xì)胞中第六實(shí)驗(yàn)組(1000u/ml的rhIL-4和1000u/ml的rhGM-CSF,培養(yǎng)5天后加入TNF-α50u/ml)的HLA-DR,CD14, CD83和CD86高表達(dá),與其他組相比較P0.05,CMNC誘導(dǎo)培養(yǎng)生成DC細(xì)胞的含量為,6組5組4組3組2組1組7組。應(yīng)用MTT比色法測(cè)定從臍血誘導(dǎo)分化的DC活化的CTL細(xì)胞能特異殺傷K562腫瘤細(xì)胞,殺傷作用遠(yuǎn)大于對(duì)照組(p0.05),在效靶比為10:1時(shí)殺傷作用最大(p0.01),MTT比色法測(cè)得值為28.97±6.62%,提示殺傷率隨效靶比的增加而增加。 結(jié)論 CMNC可在體外經(jīng)細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)成為DC,其中在1000u/ml的rhIL-4和1000u/ml的rhGM-CSF,培養(yǎng)5天后加入TNF-α50u/ml的條件下誘導(dǎo)DC的數(shù)量最多;rhIL-4、rhGM-CSF和TNF-α不僅可以促進(jìn)細(xì)胞形態(tài)的生成,而且明顯增加DC生成數(shù)量。并且DC在體外能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗人紅白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞毒效應(yīng)。
[Abstract]:Objective to observe the morphology and immunophenotype of human umbilical cord blood dendritic cells (Dendritic cells,DC) in vitro and to investigate the effect of DC on the CTL activity of tumor effector cells. Methods Cord blood was collected under aseptic condition and (cord blood mononuclear cell,CMNC was separated from cord blood mononuclear cells (cord blood mononuclear cell,CMNC). The mononuclear cells (mononuclear cell,MNC) were divided into 7 groups. Each group was added with RPMI-1640 medium of 3ml, and different cytokine combinations were added to induce the formation of DC. One group was the control group, without any cytokine culture, the other six groups were added rhIL-4 and rhGM-CSF, respectively, and 3 groups were added TNF- 偽 路14 d after the fifth day, the adherent DC cells were collected, and the immunophenotypes of CD83,CD86,CD14,HLA-DR were detected by flow cytometry. The cytotoxicity of T cells activated by DC and control cells (allogeneic lymphocyte group) on human erythroleukemia cell line K562 was detected by MTT colorimetry. Results after 14 days of CMNC culture in 7 groups, the high expression of HLA-DR,CD14, CD83 and CD86 in the sixth experimental group (rhIL-4 of 1000u/ml and rhGM-CSF, of 1000u/ml) were detected by flow cytometry after adding TNF- 偽 50u/ml for 5 days. Compared with other groups, the content of P0.05-CMNC-induced DC cells was as follows: 6 groups, 5 groups, 4 groups, 3 groups, 2 groups, 1 group, 7 groups. K562 tumor cells were specifically killed by DC activated CTL cells induced from cord blood by MTT colorimetric assay. The killing effect was much greater than that in the control group (p0.05), and the maximum killing effect (p0.01) was obtained by MTT colorimetry at 10:1, indicating that the killing rate increased with the increase of the effect-target ratio. Conclusion CMNC can be induced into DC, by cytokine combination in vitro. The number of DC induced by TNF- 偽 50u/ml is the most in 1000u/ml rhIL-4 and 1000u/ml rhGM-CSF, culture for 5 days. RhIL-4 rhGM-CSF and TNF- 偽 can not only promote the formation of cell morphology. Moreover, the amount of DC production was significantly increased. Moreover, DC can induce cytotoxic effect of human erythroleukemia cell line K562 in vitro.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2234397