發(fā)布時(shí)間：2018-09-09 08:33

【摘要】：目的構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a(+)-cfp-10-esat-6-ppe68,得到重組結(jié)核分枝桿菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白及兔抗結(jié)核分枝桿菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白的多克隆抗體,為下一步應(yīng)用于臨床結(jié)核病的檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。方法將結(jié)核分枝桿菌cfp-10-esat-6-ppe68基因轉(zhuǎn)入質(zhì)粒pET32a,將經(jīng)PCR、酶切、序列測(cè)定鑒定為陽(yáng)性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌DE3,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,經(jīng)親和層析法純化重組蛋白后用凝血酶切除載體蛋白,免疫家兔制備多克隆抗體并進(jìn)行純化。結(jié)果成功構(gòu)建重組質(zhì)粒表達(dá)體系pET32a(+)-cfp-10-esat-6-ppe68,制得去除載體蛋白的高純度重組蛋白CFP-10-ESAT-6-PPE68,并成功得到高純度抗結(jié)核分枝桿菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白的抗體。結(jié)論成功表達(dá)結(jié)核重組蛋白并制得高純度多克隆抗體。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant plasmid pET32a () -cfp-10-esat-6-ppe68 and to obtain the polyclonal antibodies against the recombinant Mycobacterium tuberculosis CFP-10-ESAT-6-PPE68 protein and the rabbit anti-Mycobacterium tuberculosis CFP-10-ESAT-6-PPE68 protein. Methods the cfp-10-esat-6-ppe68 gene of Mycobacterium tuberculosis was transferred into plasmid pET32a, and digested by PCR,. The positive plasmid was transformed into Escherichia coli DE3,IPTG to induce the expression of recombinant protein. The recombinant protein was purified by affinity chromatography and the carrier protein was removed by thrombin. The polyclonal antibody was prepared and purified by immunizing rabbits. Results the recombinant plasmid pET32a () -cfp-10-esat-6-ppe68 was successfully constructed, and the high purity recombinant protein CFP-10-ESAT-6-PPE68, was obtained by removing the carrier protein and the antibody against CFP-10-ESAT-6-PPE68 protein of Mycobacterium tuberculosis was successfully obtained. Conclusion the recombinant TB protein was successfully expressed and the high purity polyclonal antibody was prepared.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院;
【基金】：四川省公益性研究計(jì)劃項(xiàng)目(2008SZ0106)
【分類號(hào)】：R378.911

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 龐學(xué)燕;季昀;王洪榮;魏宗友;王夢(mèng)芝;;奶牛α_s-酪蛋白多克隆抗體的制備、純化及鑒定[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2012年11期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 祖力皮也·吐?tīng)栠d;丁劍冰;;重組卡介苗及其載體在感染性疾病中的應(yīng)用[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2013年05期

2 郄霜;張立;戴振華;趙平;楊錫琴;郭蘭芹;修冰水;陳X;王國(guó)華;張賀秋;馮曉燕;;結(jié)核分枝桿菌融合抗原38F和64F診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的價(jià)值[J];中國(guó)防癆雜志;2013年09期

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1 何秀云;邵進(jìn)士;黃香玉;張春青;宋慶德;李軍麗;莊玉輝;;結(jié)核分枝桿菌多表位蛋白與PstS1融合的原核表達(dá)及免疫原性初探[A];中國(guó)防癆協(xié)會(huì)80周年紀(jì)念暨2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2013年

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1 尹曉敏;牛分枝桿菌Mb1514基因的原核表達(dá)及功能分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 于磊;轉(zhuǎn)錄因子CEBPB在全反式維甲酸誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血病中靶基因的確認(rèn)（合成生物學(xué)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用）[D];中南大學(xué);2013年

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1 孔紅梅;新型結(jié)核疫苗p846的保護(hù)作用及其機(jī)制探討[D];蘇州大學(xué);2013年

2 姜振民;結(jié)核分枝桿菌38kDa抗原特異TCR基因修飾iNKT細(xì)胞及其活性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 張和平;岳喜慶;馮巧萍;劉長(zhǎng)江;孟憲文;;飽和硫酸銨法提取血清中IgG最佳條件的研究[J];中國(guó)乳品工業(yè);2006年01期

2 張濤;龐廣昌;;酶聯(lián)免疫法快速測(cè)定原料乳中α_s-酪蛋白質(zhì)量濃度[J];中國(guó)乳品工業(yè);2006年02期

3 李震,陳永福;牛乳β-酪蛋自檢測(cè)的ELISA方法[J];山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年04期

4 張濤;龐廣昌;;酶聯(lián)免疫法快速測(cè)定原料乳中κ-酪蛋白含量[J];食品工業(yè)科技;2006年11期

5 宋宏新;韓燕;孟靜;;牛乳β-酪蛋白檢測(cè)的間接ELISA方法[J];食品科技;2008年08期

6 秦宜德,鄒思湘;乳蛋白的主要組分及其研究現(xiàn)狀[J];生物學(xué)雜志;2003年02期

7 楊苗;侯先志;楊銀芬;考桂蘭;高愛(ài)武;王秀美;韓亞南;;牛β-酪蛋白多克隆抗體的制備及鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2010年11期

【相似文獻(xiàn)】

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1 高彬;張海燕;范海;;標(biāo)記蛋白HPT的表達(dá)、純化及免疫活性鑒定[J];植物研究;2011年01期

2 張佳鍇;孟慶宇;程小峰;劉瑞振;莊國(guó)洪;;Fas胞外區(qū)基因的構(gòu)建、表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備[J];中國(guó)生化藥物雜志;2010年01期

3 唐保東;劉思純;張常然;徐雅;;人類DLK1基因的克隆、表達(dá)、純化及抗體制備[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

4 高華;高旭;姜成剛;趙立平;馬學(xué)恩;周建華;;中國(guó)株馬傳染性貧血病病毒S2基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年07期

5 張軍;靳風(fēng)爍;何畏;萬(wàn)江華;粱培禾;李彥鋒;;人精子蛋白FSCB的表達(dá)、純化和多克隆抗體制備[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年21期

6 黃海麗;鄭文嶺;趙蕊;嚴(yán)啟濤;蔡翠霞;張寶;馬文麗;;人FBXO31蛋白的原核表達(dá)及抗體制備[J];中國(guó)生物工程雜志;2010年07期

7 陳麗;姜代勛;任超;陳益山;李佳;陳武;;豬磷酸二酯酶4B2的原核表達(dá)和活性鑒定[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年09期

8 譚才鄧;李靜;李峰;莊楚雄;;水稻PDK2基因原核表達(dá)和多克隆抗體制備[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2009年06期

9 黃美容;黃健;王虹;徐繡宇;王鵬;尹一兵;胥文春;;脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2011年04期

10 王e，

本文編號(hào)：2231862