【摘要】： 目的研究人類巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染對HEL細(xì)胞周期、MCM2和MCM8表達(dá)的影響，探討HCMV感染可能的發(fā)病機(jī)制。 方法用HCMV感染血清饑餓法同步化的人胚肺成纖維細(xì)胞(human embryonic lung fibroblastic,HEL)。HCMV感染作為感染組，同時設(shè)非感染組為對照組，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變至感染后7天。于HCMV感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收獲細(xì)胞，提取總RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT—PCR)檢測HEL細(xì)胞MCM2和MCM8的表達(dá)水平。 結(jié)果 1、非感染組未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。感染組感染HCMV 48h后，可見細(xì)胞變形顯著，部分梭形細(xì)胞變成突起豐富的單個球形細(xì)胞，72h后病變更加明顯，細(xì)胞絕大部分變成圓形、橢圓形，胞體及胞核增大，胞質(zhì)混濁，細(xì)胞透光性降低。7天時可見所有感染細(xì)胞均發(fā)生類似病變。 2、感染組在感染后12h有71.4％的HEL細(xì)胞處于G_1期，24h仍有70.2％的細(xì)胞處于G_1期。非感染組在感染后12h有63.5％的HEL細(xì)胞處于G_1期，24h有45.5％的細(xì)胞處于G_1期。兩組比較，均有顯著性差異(P＜0.01)。 3、12h、24h、48h、72h、96h兩組細(xì)胞MCM2和MCM8 mRNA表達(dá)水平均有顯著性差異(P＜0.05)，12h和24h時感染組表達(dá)水平低于非感染組，48h、72h、96h時感染組表達(dá)水平明顯高于非感染組。在上述5個時間點中，非感染組MCM2、MCM8 mRNA表達(dá)水平的高峰出現(xiàn)在感染后24h，而感染組表達(dá)水平的高峰則出現(xiàn)在感染后48h，較之有明顯滯后。 結(jié)論： 1、HCMV感染影響了HEL細(xì)胞周期，大部分HEL細(xì)胞停滯在G_1期。 2、HCMV感染能誘導(dǎo)MCM2及MCM8 mRNA表達(dá)異常，，使HEL細(xì)胞MCM2及MCM8 mRNA表達(dá)水平遲滯，這可能是HCMV感染導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯于G_1期的機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective to study the effect of human cytomegalovirus (human cytomegalovirus,HCMV) infection on the expression of MCM2 and MCM8 in HEL cell cycle, and to explore the possible pathogenesis of HCMV infection. Methods Human embryonic lung fibroblasts (human embryonic lung fibroblastic,HEL). HCMV infected with HCMV were used as infection group and non-infected group as control group. Flow cytometry was used to detect cell cycle. The morphologic changes of the two groups were observed by inverted phase contrast microscope until 7 days after infection. The total RNA, was extracted from the cells harvested 12 h after HCMV infection at 24 h, 48 h and 96 h. The expression levels of MCM2 and MCM8 in HEL cells were detected by semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Results 1. No morphological changes were found in the non-infected group. After infection with HCMV for 48 h, the cells deformed significantly, some fusiform cells became protruding single spherical cells and the lesion became more obvious 72 hours later, most of the cells became round, oval, the cell body and nucleus increased, and the cytoplasm was turbid. In the infected group, 71.4% of the HEL cells in the infected group were in GSCL phase 1 and 70.2% of the cells were still in GSCL phase 1 at 12 h after infection. In the non-infected group, 63.5% of the HEL cells were in phase 1 and 45.5% of the cells were in phase 1 at 12 h after infection. The two groups were compared, The expression levels of MCM2 and MCM8 mRNA in the two groups were significantly different (P < 0. 05). The expression level of MCM2 and MCM8 mRNA in the infected group was lower than that in the non infected group at 12 h and 24 h. The expression level of MCM2 and MCM8 mRNA in the infected group was significantly lower than that in the non infected group at 48 h and 72 h and 96 h after infection (P < 0. 05), and the expression level of MCM8 mRNA in the infected group was significantly lower than that in the non infected group at 12 h and 24 h (P < 0. 05). The level was significantly higher than that in non-infection group. In the above five time points, the peak of MCM2,MCM8 mRNA expression in the non-infected group was 24 hours after infection, while the peak in the infected group was 48 hours after infection, which was significantly delayed compared with that in the infected group. Conclusion: 1HCMV infection affects the cell cycle of HEL, and most of the HEL cells stagnate in G1 phase. 2HCMV infection can induce abnormal expression of MCM2 and MCM8 mRNA. The delayed expression of MCM2 and MCM8 mRNA in HEL cells may be one of the mechanisms of cell cycle arrest induced by HCMV infection.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R373

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本文編號：2222836