【摘要】：背景與目的：人分泌性白細胞蛋白酶抑制劑(human secretory leukocyte protease inhibitor，hSLPI)是一種低分子量的嗜彈性蛋白酶抑制劑，為粘膜分泌的非糖基化蛋白。SLPI來源于上皮細胞、肥大細胞、中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞，廣泛分布在皮膚、呼吸道、胃腸道、唾液腺和生殖腺。SLPI能抑制中性粒細胞的彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、肥大細胞的類糜蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶，在變態(tài)反應性疾病和炎癥中起重要作用。檢測SLPI的水平有利于深入了解在變態(tài)反應性疾病和粘膜炎癥發(fā)病機制中，蛋白酶和蛋白酶抑制劑平衡的問題。因此，制備廉價、有效的抗hSLPI單克隆抗體(mAb)具有重要意義。 方法：以hSLPI為免疫原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤NS-1細胞融合。通過間接ELISA法篩選可特異性分泌抗hSLPI mAb的雜交瘤細胞。采用Ig類與亞類鑒定試劑盒鑒定mAb的Ig亞類；通過ELISA、Western blot、免疫組織化學染色法、流式細胞分析、激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)鑒定mAb的特異性。 結(jié)果：獲得10株可穩(wěn)定分泌抗hSLPI mAb的雜交瘤細胞，其分泌的mAb均為IgM。Western blot分析表明，此mAb所識別的靶分子的相對分子質(zhì)量(Mr)約為12000。免疫組織化學染色表明，mAb與肺、結(jié)腸及包皮組織中的上皮細胞、疑似肥大細胞，扁桃體組織中的疑似肥大細胞的反應性呈陽性。流式細胞儀分析顯示，10株mAb與人肺腺癌細胞系A(chǔ)549細胞中的SLPI均呈陽性反應。激光共聚焦掃描顯微鏡觀察，熒光標記的陽性反應物主要位于A549細胞的胞漿內(nèi)。 結(jié)論：成功地制備抗hSLPI mAb，為變態(tài)反應性疾病和炎癥性疾病的研究工作提供了有用的試劑。
[Abstract]:Background & AIM: human secretory leukocyte protease inhibitor (human secretory leukocyte protease inhibitor,hSLPI) is a low molecular weight elastase inhibitor. Monocytes and macrophages, widely distributed in the skin, respiratory tract, gastrointestinal tract, salivary gland and gonad. SLPI inhibits neutrophil elastase, cathepsin G, mast cell chymoid, trypsin and chymotrypsin. Play an important role in allergic diseases and inflammation. The level of SLPI is helpful to understand the balance of protease and protease inhibitor in the pathogenesis of allergic diseases and mucosal inflammation. Therefore, the preparation of cheap and effective anti-hSLPI monoclonal antibody (mAb) is of great significance. Methods: BALB/c mice were immunized with hSLPI. Spleen cells of mice were fused with NS-1 cells of myeloma mice. Hybridoma cells secreting anti-hSLPI mAb were screened by indirect ELISA method. The Ig subclasses of mAb were identified by Ig and subclass identification kit, and the specificity of mAb was identified by ELISA,Western blot, immunohistochemical staining, flow cytometry and confocal laser scanning microscopy. Results: ten hybridoma cells stably secreting anti hSLPI mAb were obtained. The mAb secreted by the hybridoma cells were all analyzed by IgM.Western blot. The relative molecular weight (Mr) of the target molecule recognized by the mAb was about 12 000. Immunohistochemical staining showed that mAb was positive for the reactivity of epithelial cells in lung, colon and prepuce tissues, suspected mast cells, and suspected mast cells in tonsils. Flow cytometry analysis showed that 10 mAb strains were positive for SLPI in human lung adenocarcinoma cell line A549. The fluorescence labeled positive reactants were mainly located in the cytoplasm of A549 cells under confocal laser scanning microscope. Conclusion: the successful preparation of anti-hSLPI mAb, provides a useful reagent for the study of allergic and inflammatory diseases.
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2218012