【摘要】：目的:利用已經(jīng)構(gòu)建好的腺相關(guān)病毒-人組織激肽釋放酶基因重組體 (rAAV-HTK),感染人工培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),觀察HUVEC 細(xì)胞合成組織激肽釋放酶蛋白量的變化,以及rAAV-HTK 轉(zhuǎn)染對(duì)內(nèi)皮細(xì) 胞功能的影響,探討利用rAAV-HTK 治療高血壓、缺血性心臟病的可行 性。 方法:1.將已經(jīng)構(gòu)建好的rAAV-HTK 重組質(zhì)粒感染人工培養(yǎng)的HUVEC 細(xì)胞。2. 應(yīng)用ELISA 方法測(cè)定HUVEC 細(xì)胞上清液和細(xì)胞內(nèi)人組織激肽釋放酶 (HTK)的含量。3.應(yīng)用半定量RT-PCR 方法檢測(cè)感染rAAV-HTK 前后 HUVEC 中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡蛋白酶(caspase-3)、 內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、內(nèi)皮素B_1受體(ETR-B_1) 以及緩激肽B_1受體、緩激肽B_2受體的mRNA 表達(dá)量變化情況。 結(jié)果:1.轉(zhuǎn)染有rAAV-HTK 的HUVEC 細(xì)胞內(nèi)HTK 含量比對(duì)照組增高3 倍。2.在 人工培養(yǎng)的HUVEC 細(xì)胞上清液中沒有檢測(cè)到HTK。3.轉(zhuǎn)染有rAAV-HTK 的HUVEC 細(xì)胞與對(duì)照組相比,其細(xì)胞內(nèi)eNOS 的mRNA 合成量增加, caspase-3 的mRNA 表達(dá)量降低,VEGF、ET-1、ETR-B_1、緩激肽B_1受體、 緩激肽B_2受體的mRNA 表達(dá)量沒有變化。 結(jié)論:rAAV-HTK 重組體感染HUVEC 細(xì)胞可以使HUVEC 細(xì)胞合成HTK 增多,eNOS 的mRNA 表達(dá)量增高,NO 產(chǎn)生增加,caspase-3 的mRNA 表達(dá)量減低。 這些作用提示HTK 能夠改善內(nèi)皮細(xì)胞功能,在實(shí)踐上為高血壓等血管 內(nèi)皮功能異常的心血管疾病的基因治療奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to investigate the changes of tissue kallikrein protein in HUVEC cells infected with human umbilical vein endothelial cells (HUVEC),) by using the recombinant adeno-associated virus human tissue kallikrein gene (rAAV-HTK). The effect of rAAV-HTK transfection on endothelial fine cell function and the feasibility of using rAAV-HTK to treat hypertension and ischemic heart disease were discussed. Method 1: 1. The constructed rAAV-HTK recombinant plasmid was infected with cultured HUVEC cells. The content of human tissue kallikrein (HTK) in supernatants and cells of HUVEC cells was determined by ELISA method. Semi-quantitative RT-PCR was used to detect endothelial nitric oxide synthase (eNOS), apoptotic protease (caspase-3), endothelin 1 (ET-1), vascular endothelial growth factor (VEGF), endothelin B1 receptor (ETR-B_1) and bradykinin B1 receptor in HUVEC before and after rAAV-HTK infection. Changes of mRNA expression of bradykinin B 2 receptor. The result is 1: 1. The content of HTK in HUVEC cells transfected with rAAV-HTK was increased by 3 times. 2 times than that in control group. HTK.3 was not detected in the supernatant of cultured HUVEC cells. Compared with the control group, the mRNA synthesis of eNOS was increased in HUVEC cells transfected with rAAV-HTK, the mRNA expression of caspase-3 was decreased, the expression of bradykinin B1 receptor and bradykinin B2 receptor was not changed. Conclusion infection of HUVEC cells with the recombinant fraction of rAAV-HTK can increase the mRNA expression of Enos in HUVEC cells and increase the production of no, increase the expression of caspase-3 in HUVEC cells. These effects suggest that HTK can improve endothelial cell function and lay a foundation for gene therapy of vascular endothelial dysfunctional cardiovascular diseases such as hypertension.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

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5 李s，

本文編號(hào)：2197014