【摘要】：目的: 以大鼠為研究對(duì)象,探討(1) 大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外培養(yǎng)、定向誘導(dǎo)分化為胰腺β細(xì)胞;(2)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)分化為胰腺β細(xì)胞;(3)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)糖尿病大鼠血糖的影響。 方法: (1) 從大鼠股骨處取骨髓,用Ficoll 細(xì)胞分離液分離骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。在細(xì)胞培養(yǎng)液中分別加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGFβ)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、煙酰胺(Nicotinamide)以及與胰島細(xì)胞共培養(yǎng),誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向胰腺β細(xì)胞分化,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察、熒光免疫組化檢測(cè)胰島素、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)胰島素、生長(zhǎng)抑素、胰高糖素和Pdx-1 胰腺相關(guān)基因mRNA的表達(dá),判斷骨髓基質(zhì)干細(xì)胞是否分化為胰腺β細(xì)胞。 (2) 應(yīng)用Hoechst 33258 細(xì)胞核熒光染料標(biāo)記骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,將標(biāo)記后的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植至大鼠胰腺組織中,每三天取大鼠胰腺組織做冰凍切片,觀察熒光標(biāo)記的細(xì)胞在組織中的定植情況,并通過(guò)熒光免疫組化檢測(cè)熒光細(xì)胞胰島素的表達(dá),判斷骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)是否分化為胰腺β細(xì)胞。 (3)運(yùn)用單次腹腔注射鏈脲菌素(Streptozotocin,STZ)制備大鼠糖尿病模型,大鼠血糖連續(xù)三次高于16mmol 定為糖尿病大鼠,糖尿病大鼠隨機(jī)分為兩組:骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植組和培養(yǎng)基注射組。將10~6骨髓基質(zhì)干細(xì)胞懸浮于200μl 無(wú)血清培養(yǎng)液中,開腹后經(jīng)微量注射器直接注射至胰腺組織中;培養(yǎng)基注射組作為對(duì)照組,將200μl 無(wú)血清培養(yǎng)液注射至胰腺組織中。 分別檢測(cè)細(xì)胞移植后3 天,一周大鼠血糖水平,觀察大鼠血糖變化。 結(jié)果: (1)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在TGFβ細(xì)胞因子作用下,有極少數(shù)細(xì)胞分化為胰島素蛋白水平表達(dá)陽(yáng)性,胰島素和Pdx-1 基因表達(dá)陽(yáng)性的類胰腺β細(xì)胞,而生長(zhǎng)抑素、胰高糖素基因表達(dá)為陰性;骨髓基質(zhì)干細(xì)胞與胰島細(xì)胞共培養(yǎng),骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分化
[Abstract]:Objective: to investigate the culture of rat bone marrow stromal cells (MSCs) in vitro. Differentiation into pancreatic 尾 cells; (2) differentiation of rat bone marrow stromal cells into pancreatic 尾 cells in vivo; (3) effects of transplantation of rat bone marrow stromal cells on blood glucose in diabetic rats. Methods: (1) Bone marrow stromal cells were isolated from rat femur and cultured with Ficoll cells. Transforming growth factor 尾 (TGF 尾), fibroblast growth factor (bFGF), nicotinamide (Nicotinamide) and co-culture with islet cells were added to the cell culture medium to induce the differentiation of bone marrow stromal cells into pancreatic 尾 cells. The expression of insulin, somatostatin, glucagon and mRNA were detected by fluorescence immunohistochemistry and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). To determine whether bone marrow stromal cells differentiated into pancreatic 尾 cells. (2) Hoechst 33258 nuclear fluorescent dye was used to label bone marrow stromal stem cells. The labeled bone marrow stromal stem cells (BMSCs) were transplanted into the pancreatic tissues of rats. The pancreatic tissues of rats were taken every three days for frozen sections to observe the colonization of fluorescent labeled cells in the tissues. The expression of insulin in fluorescent cells was detected by fluorescence immunohistochemistry. (3) single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) was used to induce diabetic rat model. Diabetic rats were randomly divided into two groups: bone marrow stromal cell transplantation group and medium injection group. Bone marrow stromal stem cells (BMSCs) were suspended in 200 渭 l serum-free medium and injected directly into pancreatic tissue by microinjector after laparotomy, and 200 渭 l serum-free medium was injected into pancreatic tissue in the medium injection group as control group. Blood glucose levels were measured at 3 days and 1 week after transplantation, and the changes of blood glucose in rats were observed. Results: (1) under the action of TGF 尾 cytokines, a few rat bone marrow stromal cells differentiated into insulin protein positive expression. Pancreatic 尾-like cells with positive expression of insulin and Pdx-1 gene, but negative expression of somatostatin and glucagon genes. Bone marrow mesenchymal stem cells co-cultured with islet cells, bone marrow stromal cells differentiated
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2194210