【摘要】：目的：鑒定出漢灘病毒核蛋白(HTNV-NP)上的CD4~+T細胞和CD8~+T細胞表位。 方法：(1)用HTNV-NP部分重疊合成肽體外刺激HFRS患者PBMC，應用ELISPOT方法篩選出可刺激HFRS患者PBMC產(chǎn)生IFN-γ的合成肽組，，再篩選出該組中的單個陽性15肽。(2)用EB病毒轉(zhuǎn)化HFRS患者PBMC，建立EBV轉(zhuǎn)化的B淋巴母細胞系(B-LCL)。用免疫磁珠分離HFRS患者PBMC中的CD4~+T細胞或CD8~+T細胞作為效應細胞，與加載過陽性15肽的自身B-LCL共同孵育，應用ELISPOT方法確定15肽可否刺激CD4~+T細胞或CD8~+T細胞產(chǎn)生IFN-γ，可刺激CD4~+T細胞產(chǎn)生IFN-γ的15肽即為CD4~+T細胞表位，可刺激CD8~+T細胞產(chǎn)生IFN-γ的15肽中，則可能包含有CD8~+T細胞表位。(3)應用生物信息學對可刺激CD8~+T細胞產(chǎn)生IFN-γ的15肽序列中包含的9肽表位進行預測，用蛋白質(zhì)自動合成儀合成預測9肽，并應用ELISPOT鑒定出其中可刺激CD8~+T細胞產(chǎn)生IFN-γ的9肽CTL表位。(4)用HLA-DR、DP和DQ的阻斷抗體與PBMC預先孵育30min后，再加入15肽，共同孵育過夜，應用ELISPOT阻斷試驗確定CD4~+T細胞表位的HLA-DR、DP或DQ限制性。(5)以
[Abstract]:Aim: to identify CD4 ~ T cells and CD8 ~ T cell epitopes of Hantaan virus nucleoprotein (HTNV-NP). Methods: (1) PBMCs of HFRS patients were stimulated by partial overlapping synthetic peptide of HTNV-NP in vitro. The synthetic peptide groups which could stimulate PBMC production of IFN- 緯 in HFRS patients were screened by ELISPOT method. Then a single positive 15 peptide was screened. (2) B lymphoblastoid cell line (B-LCL) transformed by EBV was established by transforming EBV into PBMCs of HFRS patients. CD4T cells or CD8T cells isolated from PBMC of HFRS patients were isolated by immunomagnetic beads as effector cells and incubated with B-LCL loaded with positive 15-peptide. The ELISPOT method was used to determine whether the 15-peptide can stimulate the production of IFN- 緯 by CD4T cells or CD8T cells. The 15 peptides that can stimulate the production of IFN- 緯 by CD4T cells are CD4T cell epitopes, among the 15 peptides that stimulate CD8T cells to produce IFN- 緯. It may contain CD8T cell epitopes. (3) bioinformatics was used to predict 9 peptide epitopes contained in 15 peptide sequences that stimulate CD8T cells to produce IFN- 緯. ELISPOT was used to identify 9 peptide CTL epitopes which could stimulate CD8 ~ T cells to produce IFN- 緯. (4) 30min was preincubated with PBMC with HLA-DRDP and DQ blocking antibodies, and then 15 peptides were added to it for overnight incubation. ELISPOT blocking assay was used to determine HLA-DRN DP or DQ restriction of CD4 ~ T epitopes.
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2182715