【摘要】：神經(jīng)干細胞的發(fā)現(xiàn),更新了以往認為神經(jīng)元不能再生的傳統(tǒng)觀點,使人們對神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能有了一個全新的認識。神經(jīng)干細胞不僅可以作為研究神經(jīng)發(fā)育的模型,并且,作為潛在的移植細胞的來源,為臨床治療神經(jīng)系統(tǒng)疾患提供了一個新的有效治療途徑。如果神經(jīng)干細胞能像造血干細胞那樣得到深入研究,并且能夠大量獲得,進而異體移植成功,必然會對醫(yī)學進步起重大的推動作用。目前,關(guān)于神經(jīng)干細胞的研究雖然很多,但距離實際應用還有很大的差距。因此,選擇神經(jīng)干細胞作為研究對象,對體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞的生長特性,形態(tài)結(jié)構(gòu)進行較深入的研究;并探討誘導神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元定向分化的有效方法;同時檢測神經(jīng)干細胞中DNA 拓撲異構(gòu)酶II 的表達情況,期望能夠找到調(diào)控神經(jīng)干細胞增殖和定向分化的新切入點。本研究分四部分。 第一部分:大鼠神經(jīng)干細胞體外生長特性 目的:介紹一種較成熟的大鼠神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)方法,并觀察其體外生長特性。 方法: 1 神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng) 取新生大鼠(1d 之內(nèi))側(cè)腦室前角周圍的腦組織,用EDTA㑳胰蛋白酶(1㑳1)消化, 制成單細胞懸液,接種于無血清培養(yǎng)基(含B27 和20ng/ml bFGF,20ng/ml EGF 的DMEM/F12 培養(yǎng)基)中,觀察神經(jīng)干細胞的體外生長過程,并比較不同接種密度,不同傳代時間對神經(jīng)干細胞生長的影響。2 大鼠神經(jīng)干細胞的鑒定2.1 nestin 免疫細胞化學:取傳至第3 代細胞,傳代后3d,做nestin 免疫細胞化學,一抗為兔抗鼠nestin 多克隆抗體(1:50),4℃,24h;FITC標記的二抗(1:30),37℃,2h。2.2 生長曲線繪制:取傳至第3 代的神經(jīng)干細胞,以5×10~5個細胞/ml 密
[Abstract]:The discovery of neural stem cells has renewed the traditional view that neurons can not regenerate, and has given people a new understanding of the structure and function of the nervous system. If neural stem cells can be thoroughly studied like hematopoietic stem cells, and can be obtained in large quantities, and then allogeneic transplantation is successful, it will certainly play a major role in promoting medical progress. To study the growth characteristics and morphology of neural stem cells cultured in vitro, explore the effective methods of inducing neural stem cells to differentiate into neurons, and detect the expression of DNA topoisomerase II in neural stem cells, hoping to find a way to regulate neural stem cells. The new breakthrough point of cell proliferation and directional differentiation is divided into four parts.
Part one: growth characteristics of rat neural stem cells in vitro
OBJECTIVE: To introduce a mature method for culturing rat neural stem cells in vitro and observe their growth characteristics.
Method:
1 Isolation and culture of neural stem cells
The brain tissue around the anterior horn of lateral ventricle of neonatal rats (within one day) was digested with EDTA? Trypsin (1? 1) and made into a single cell suspension. The cells were inoculated in serum-free medium (DMEM / F12 medium containing B27 and 20ng / ml bFGF, 20ng / ml EGF). The growth process of neural stem cells in vitro was observed and the effects of different inoculation densities and passages on the nervous system were compared. Identification of neural stem cells by stem cell growth. 2. 1 nestin immunocytochemistry: 3 days after passage, nestin immunocytochemistry, rabbit anti-nestin polyclonal antibody (1:50), 4 C, 24 h; FITC labeled second antibody (1:30), 37 C, 2 h. The cells were 5 * 10~5 cells /ml dense.
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R329

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