【摘要】： 前纖維蛋白(profilin)作為一種泛過敏原(pan-allergen)廣泛存在于樹木、雜草等花粉中。刺莧(Amaranthus spinosus L．)為莧科、莧屬一年生草本植物。目前，刺莧花粉已經(jīng)成為我國華南地區(qū)一種重要的吸入性過敏原，對該花粉中泛過敏原基因克隆表達有著重要的理論與實際意義。本文主要采用生物信息學(xué)方法，從數(shù)據(jù)庫中獲得已知植物花粉泛過敏原profilin的氨基酸序列，通過多重序列比對和構(gòu)建進化樹，獲得核心代表序列。經(jīng)同源性比較，以序列保守區(qū)設(shè)計合成引物，采用遞減式PCR(touchdown PCR)技術(shù)從刺莧花粉的cDNA池(cDNA pool)中進行基因克隆，結(jié)果獲得兩個不同的基因，分別命名為prf7和prf23。通過序列測定及比對分析，初步確定所克隆基因為一種泛過敏原基因。之后將prf23基因連接到表達載體pET-44a上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進行誘導(dǎo)表達，經(jīng)SDS-PAGE證實，prf23基因能夠編碼一種蛋白。最后結(jié)合生物信息學(xué)從蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)和抗原性高低角度對這兩個致敏蛋白進行分析比較。本研究的重要意義在于：通過對過敏原基因的獲得和蛋白質(zhì)水平功能預(yù)測分析，，為臨床應(yīng)用重組過敏原治療和過敏原的基因工程改造奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Prefibrin (profilin), as a panallergen (pan-allergen), is widely found in pollen such as trees, weeds and so on. (Amaranthus spinosus L.) is an annual herbaceous plant of the genus Amaranthus. At present, amaranth pollen has become an important inhaled allergen in South China, which has important theoretical and practical significance for the cloning and expression of panallergen gene in this pollen. In this paper, the amino acid sequences of plant pollen panallergen profilin were obtained from the database by bioinformatics, and the core representative sequences were obtained by multiple sequence alignment and phylogenetic tree construction. By homology comparison, primers were designed and synthesized with sequence conserved region. The gene was cloned from cDNA pool (cDNA pool) of purslane pollen by decreasing PCR (touchdown PCR) technique. Two different genes were obtained, named prf7 and prf23, respectively. The cloned gene was identified as a panallergen gene by sequence determination and alignment analysis. Then the prf23 gene was ligated to the expression vector pET-44a and transformed into Escherichia coli for expression, and the SDS-PAGE confirmed that the gene could encode a protein. Finally, the two sensitized proteins were analyzed and compared in terms of their three-dimensional spatial structure and antigenicity with bioinformatics. The significance of this study lies in: through the acquisition of allergen genes and the analysis of protein level function prediction, we can lay a foundation for clinical application of recombinant allergen therapy and genetic engineering of allergens.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：2172557