發(fā)布時(shí)間：2018-08-05 15:10

【摘要】：第一部分 神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記 目的 神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)的研究已逐漸成為國(guó)內(nèi)、外基礎(chǔ)及臨床醫(yī)學(xué)各專業(yè)的重要研究課題。NSC是一種成體干細(xì)胞，存在于胚胎和成年哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多個(gè)區(qū)域，屬多能干細(xì)胞，，在一定的微環(huán)境中具有自我更新和向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力，且具有極強(qiáng)的可塑性，利用NSC進(jìn)行細(xì)胞治療或基因治療有很好的臨床應(yīng)用前景。豚鼠在耳科學(xué)基礎(chǔ)研究中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，并得到廣大耳科學(xué)研究者的廣泛應(yīng)用，建立一種簡(jiǎn)便、可行的豚鼠NSC培養(yǎng)方法將為NSC在耳科學(xué)領(lǐng)域研究的深入開展提供細(xì)胞支持，但目前關(guān)于豚鼠NSC的培養(yǎng)方法介紹的并不多。本實(shí)驗(yàn)旨在建立一種較為簡(jiǎn)便、可靠的豚鼠NSC分離、培養(yǎng)、標(biāo)記方法，為耳科學(xué)領(lǐng)域NSC的進(jìn)一步深入研究提供幫助。 材料與方法 分離新生豚鼠海馬組織進(jìn)行NSC的原代、傳代培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)特征，培養(yǎng)的細(xì)胞行Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)，Western Biot檢測(cè)，對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞行NSE、GFAP免疫熒光化學(xué)觀察，以鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞為NSC；用熒光染料DAPI標(biāo)記干細(xì)胞，計(jì)算原代及傳代標(biāo)記率。 結(jié)果 1．原代培養(yǎng)見細(xì)胞呈大小不一、懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞團(tuán)，邊界清晰，細(xì)胞團(tuán)中細(xì)胞排列較為致密。光鏡下傳代培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)與原代培養(yǎng)無(wú)明顯差異。2．原代及傳代培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán)Nestin陽(yáng)性表達(dá)，誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞NSE、GFAP陽(yáng)性表達(dá)。3．經(jīng)熒光染料DAPI標(biāo)記后，標(biāo)記成功率可達(dá)93.4％，經(jīng)傳代8次后熒
[Abstract]:The first part is the isolation, culture, identification and labeling of neural stem cells (NSC). NSC is a kind of adult stem cells, which exist in many regions of the central nervous system of embryonic and adult mammals and belong to pluripotent stem cells. In a certain microenvironment, it has the ability of self-renewal and differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes, and has a strong plasticity. The use of NSC for cell therapy or gene therapy has a good clinical application prospects. Guinea pigs have unique advantages in the basic research of ear science and have been widely used by many ear researchers. The establishment of a simple and feasible method of guinea pig NSC culture will provide cell support for the further research of NSC in the field of ear science. But at present, the methods of guinea pig NSC culture are not much introduced. The aim of this study was to establish a simple and reliable method for the isolation, culture and labeling of guinea pig NSC, which would be helpful for the further study of NSC in the field of ear science. Materials and methods the hippocampal tissues of newborn guinea pigs were isolated and cultured with NSC. The morphological characteristics of cultured cells were observed under inverted microscope. The cultured cells were detected by Nestin immunocytochemistry and Western Biot. The induced cells were observed by immunofluorescence staining to identify the cultured cells as NSC.The labeled stem cells were labeled with fluorescent dye DAPI and the primary and passage labeling rates were calculated. Results 1. The size of cells was different in primary culture. The boundary of cell clusters was clear and the cells in the cell clusters were compact. 2. The morphological characteristics of the cells cultured under light microscope were not significantly different from those of the primary culture. 2. The positive expression of Nestin was observed in primary and subcultured cells, and the positive expression of NSE-GFAP was induced in differentiated cells. The cells were labeled with fluorescent dye DAPI. The success rate of labeling was 93.44.After passage for 8 times, it was fluorescent.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2166174