【摘要】：目的: 研究重組人白細(xì)胞介素13(recombinant human interleukin 13,rhIL-13)誘導(dǎo)紅白血病HEL(human erythroleukemia)細(xì)胞原癌基因c-fos 表達(dá)以及對(duì)HEL 細(xì)胞分化的影響,部分闡明IL-13 對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。 方法: 1.細(xì)胞培養(yǎng): HEL細(xì)胞用含10%小牛血清的RPMI 1640液體培養(yǎng)基37℃, 5% CO_2 常規(guī)培養(yǎng)。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HEL 細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為5×10~8~1×10~9 /L,在細(xì)胞因子誘導(dǎo)前先經(jīng)血清饑餓20 小時(shí)。2.總RNA 提取:以rhIL-13(100μg/L)分別誘導(dǎo)HEL 細(xì)胞不同時(shí)間,提取各組總體RNA,通過(guò)RNA電泳判斷其是否符合實(shí)驗(yàn)要求。3.RT-PCR 方法:①檢測(cè)rhIL-13 作用HEL 細(xì)胞0、4、24、48 小時(shí),IL-13 受體α1(IL-13Rα1)的mRNA 表達(dá);②檢測(cè)rhIL-13 作用HEL 細(xì)胞0、15、30、60、120 分鐘,原癌基因c-fos mRNA 的表達(dá);③檢測(cè)rhIL-13 與HEL 細(xì)胞共培養(yǎng)五天,HEL 細(xì)胞表面標(biāo)志GPA(glycophorin A),GP(glycoprotein)Ⅱb, vWF(von Willebrand Factor)等分化基因的mRNA 表達(dá)。4. Western Blotting 方法:取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HEL 細(xì)胞, 調(diào)整細(xì)胞密度為5×10~8~1×10~9 /L,經(jīng)過(guò)20h 的血清饑餓后,用rhIL-13(100μg/L)分別作用0、15、30、60、120 分鐘,RIPA Buffer 裂解細(xì)胞提取蛋白質(zhì),用Western Blotting方法檢測(cè)c-Fos 蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:①HEL 細(xì)胞表達(dá)IL-13Rα1 的mRNA。②rhIL-13 在15min 內(nèi)誘導(dǎo)HEL細(xì)胞c-fos 的mRNA 表達(dá)(P0.05),30min 達(dá)到高峰(P0.01),60min 減弱至較
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of proto-oncogene c-fos in erythroleukemia HEL (human erythroleukemia) cells induced by recombinant human interleukin 13 (rhIL-13) and its effect on the differentiation of HEL cells, and to elucidate the signal transduction mechanism of IL-13 on the regulation of cell growth. Methods: 1. Cell culture: HEL cells were routinely cultured on RPMI 1640 liquid medium containing 10% calf serum at 37 鈩，

本文編號(hào)：2154506