【摘要】：肝臟再生增強(qiáng)因子(augmenter of liver regeneration,ALR)是肝臟再生過程中的一個重要調(diào)控因子。人ALR(hALR)是分子量為15 Ku的蛋白質(zhì)分子,由125個氨基酸殘基組成,在非變性條件下以同源二聚體的方式存在,具有較強(qiáng)的耐熱性,70℃、30min不變性、不失活。肝再生研究發(fā)現(xiàn)ALR能增強(qiáng)肝細(xì)胞擴(kuò)增,阻止粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和其它細(xì)胞器的損壞,抑制淋巴細(xì)胞擴(kuò)增,對肝臟再生及肝臟功能的修復(fù)有著重要作用。動物實驗表明ALR對急性肝功能損傷有明顯療效。然而ALR的作用機(jī)理尚未完全明確,尋找與ALR相互作用的蛋白質(zhì)將有助于進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制。 本課題以hALR的編碼序列為誘餌,采用細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)對人肝cDNA文庫中可能與ALR相互作用的蛋白質(zhì)進(jìn)行了篩選,結(jié)果共得到32個陽性克隆,經(jīng)過序列測定證明分別為編碼人氨基乙酸-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶、集落刺激因子、凝血素(hemopexin)、補(bǔ)體C3、α-酸性糖蛋白2、纖維蛋白溶酶原、色素上皮細(xì)胞來源因子SERPIN F1、白蛋白、線粒體QD8159、線粒體單倍體As8D、染色體11qCMB9-78H16克隆、cDNA克隆IMAGE:3535684等的基因。經(jīng)過文獻(xiàn)調(diào)研和歸類分析,選取可能與hALR功能最相關(guān)的氨基乙酸-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(glycine-N-acyltransferase,GAT)進(jìn)行了進(jìn)一步的克隆、表達(dá)和相互作用研究。 GAT是成年動物肝細(xì)胞核基因編碼的一種線粒體蛋白,為單體分子,有兩種不同的亞型。其中a亞型由296個氨基酸殘基組成,為線性分子,分子量約為30Ku,pI為6.8:b亞型由163個氨基酸殘基組成,是分子量約18.5Ku的線性分子。b亞型的3’編碼區(qū)以及3’UTR區(qū)與a亞型有所區(qū)別,因此b亞型的轉(zhuǎn)錄本較小,其C-端的氨基酸序列與a亞型不一樣。穩(wěn)定性研究顯示,GAT在100mmol/LNaCl、KCl和K3PO4溶液條件下,其酶活性分別為47%、21%和32%。GAT在4℃ 72h、25℃ 4h以及37℃ 1h其酶活性均無改變。GAT具有多種脂酰輔酶A的活性,在線粒體中催化氨基乙酸與乙酰輔酶A底物發(fā)生反應(yīng),在內(nèi)
[Abstract]:Liver regeneration enhancement factor (augmenter of liver) is an important regulatory factor in liver regeneration. Human ALR (hALR) is a protein molecule with a molecular weight of 15 Ku. It is composed of 125 amino acid residues and exists in the form of homologous dimer under the condition of non-denaturation. It has strong heat resistance (70 鈩，

本文編號：2141632