人IL-17F基因的克
[Abstract]:Aim: to clone the artificial IL-17F gene and express it in Escherichia coli and construct human IL-17F transgenic cells and eukaryotic cells to study its biological activity. Methods: human peripheral blood mononuclear cells were isolated and stimulated by PHA, the total RNAs were extracted. A pair of primers were designed and synthesized according to the cDNA sequence of human IL-17F published by GenBank. The human IL-17F gene was cloned by RT-PCR, subcloned into pUCm-T vector and identified. The target gene fragment was amplified by PCR using the correctly sequenced pUCm-Tr / hIL-17F, and was inserted into prokaryotic expression vector pGEX-5X-3 and retrovirus vector pSIV-1, respectively. The recombinant expression vectors pGEX-5X-3 / hIL-17F and pSIV-1 / hIL-17F were constructed. Recombinant prokaryotic expression vector pGEX-5X-3 / hIL-17F was introduced into Escherichia coli BL21 and induced by IPTG to express inclusion body fusion protein. After purification, the growth inhibition of GST-hIL-17F protein on human umbilical vein endothelial cells (ECV304) and the biological effects of GST-hIL-17F protein on the expression of IL-6, IFN- 緯 and TNF- 偽 in ECV304 endothelial cells were detected by Western blotting. The effect of chorioallantoic membrane (CAM) on angiogenesis was analyzed. The recombinant retroviral vector pSIV-1 / hIL-17F was mixed with the auxiliary virus vector pHIT456 and pHIT60, and then co-transfected into 293T cells by liposome method. SMMC-7721 hepatoma cell line was infected with mature recombinant retrovirus. The resistant cell line was obtained by G418 pressurization screening, and the transcription and expression of the target gene were detected by RT-PCRG Western blot.
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2005
【分類號(hào)】:R392
【相似文獻(xiàn)】
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5 秦藝e,
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