本文選題：新生隱球菌 + RNA干擾　； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：研究背景: 隱球菌病是新生隱球菌感染所致的全身感染性疾病,好發(fā)于細(xì)胞免疫功能低下患者。近年來(lái)隱球菌感染發(fā)生率呈明顯上升的趨勢(shì),突出表現(xiàn)在愛(ài)滋病人群中,成為AIDS患者最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一,也是AIDS患者死亡的首要原因。 2000年3月啟動(dòng)的新生隱球菌基因組計(jì)劃由斯坦福大學(xué)基因組技術(shù)中心(SGTC)和美國(guó)國(guó)家基因組中心(TIGR)聯(lián)合于近期完成,為我們下一步的研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。但破解基因組的序列只是一個(gè)起點(diǎn),許多毒性相關(guān)基因的確切致病機(jī)理仍有待研究。 要對(duì)某一基因的功能進(jìn)行研究,按照經(jīng)典的分子遺傳學(xué)方法,就必須應(yīng)用同源重組的方法將該基因敲除,得到人工突變株,在此平臺(tái)基礎(chǔ)上,我們才可以通過(guò)該轉(zhuǎn)化子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能、傳代過(guò)程和生理生化表現(xiàn)及其毒力的改變深入地研究該基因的功能。不過(guò)應(yīng)用基因同源重組進(jìn)行相關(guān)基因敲除來(lái)研究其功能,耗時(shí)費(fèi)力且成功率低,為全世界科研工作者所遇到的共同難題。 而近年來(lái)興起的RNA干擾技術(shù)(RNAi),即用20多個(gè)核苷酸組成的短的雙鏈RNA(siRNA)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后基因沉默,已經(jīng)迅速而廣泛地應(yīng)用到基因功能,基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究等熱門(mén)領(lǐng)域,·RNA干擾技術(shù)作為一種簡(jiǎn)單、有效的代替基因敲除的遺傳工具,正在功能基因組學(xué)領(lǐng)域掀起一場(chǎng)真正的革命,并將徹底改變這個(gè)領(lǐng)域的研究步伐,即如果在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中,在靶細(xì)胞中引入長(zhǎng)雙鏈RNA中有與靶基因所轉(zhuǎn)錄的mRNA同源的序列,即可觸發(fā)“扳機(jī)”,引起特定的轉(zhuǎn)錄后基因沉默,使該基因功能喪失或部分喪失,從而明確其功能。 研究目的: (1) 構(gòu)建RNA干擾質(zhì)粒Pcnlacl-tel,正義RNA質(zhì)粒Pcnlacl-S-tel,反義RNA質(zhì)粒Pcnlacl-A-tel的構(gòu)建 (2) 摸索隱球菌轉(zhuǎn)化的條件,進(jìn)行一整套轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建 (3) 應(yīng)用RNA干擾技術(shù)研究酵母的基因功能,建立了一套完整的酵母基因功能研究體系及技術(shù)平臺(tái),進(jìn)一步推廣至其它酵母的基因功能研究。
[Abstract]:Background: Cryptococcosis is a systemic infectious disease caused by Cryptococcus neoformans infection. In recent years, the incidence of Cryptococcus infection is on the rise, especially in the AIDS population, becoming one of the most common complications of AIDS patients. The Cryptococcus neoformans Genome Project, launched in March 2000, was launched by the Stanford University Center for Genome Technology (SGTC) and the United States. The National Genome Center (TIGR) was jointly completed in the near future. For our next research laid a solid foundation. However, the sequence of genome is only a starting point, and the exact pathogenesis of many toxic genes remains to be studied. In order to study the function of a gene, according to the classical molecular genetic method, we must use homologous recombination to knock out the gene and get the artificial mutant. On the basis of this platform, we can pass the morphology of the transformant. The structure, function, passage, physiological and biochemical characteristics and virulence of the gene were studied in depth. However, using homologous recombination to study the function of gene knockout is time-consuming and low success rate, which is a common problem for researchers all over the world. In recent years, RNA interference (RNAi), which is composed of more than 20 nucleotides of short double-stranded RNA (siRNA) for post-transcriptional gene silencing, has been rapidly and widely used in gene function. RNA interference, as a simple and effective genetic tool instead of gene knockout, is leading a real revolution in the field of functional genomics. And will completely change the pace of research in this field, that is, if the target cells are designed to introduce a sequence homologous to the mRNA transcripted by the target gene in a long double-stranded RNA, the trigger can be triggered, causing a specific post-transcriptional gene silencing. Loss or partial loss of function of the gene, thereby clarifying its function. Objective: (1) to construct RNA interference plasmid Pcnlacl-tel, sense RNA plasmid Pcnlacl-S-teland antisense RNA plasmid Pcnlacl-A-tel. (2) explore the condition of Cryptococcus transformation, Construction of a complete set of transformation systems (3) RNA interference technique was used to study the gene function of yeast. A complete research system and technical platform of yeast gene function was established, which was further extended to other yeast gene function research.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R379.5

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2113120