本文選題：弓形蟲 + 核酸疫苗　； 參考：《山東大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】：目前，在經(jīng)歷了減毒或弱毒疫苗后，針對弓形蟲病疫苗的研究主要集中在以保護性抗原為基礎(chǔ)成分的蛋白疫苗和核酸疫苗上。作為繼病原體疫苗、亞單位疫苗之后的第三代疫苗，核酸疫苗使得弓形蟲疫苗的研究進入到一個新的階段。但動物和人體實驗均表明，單價疫苗的免疫效果不太理想，發(fā)展多種抗原組合、針對不同生活史發(fā)育階段的復(fù)合多價疫苗是弓形蟲疫苗研究的一個發(fā)展方向與共識。另外，在復(fù)合多價疫苗的研究當(dāng)中，選取某些強保護性抗原中含T淋巴細胞和(或)B淋巴細胞表位構(gòu)成的多表位疫苗，是新近發(fā)展起來的的疫苗研制趨勢。 本課題首次將弓形蟲多價和多表位基因與霍亂毒素CTXA_2/B的基因融合構(gòu)建弓形蟲的多價和多表位DNA疫苗，采用重組減毒胞內(nèi)菌(鼠傷寒減毒沙門氏菌)通過粘膜自然感染途徑運送DNA疫苗，對DNA疫苗在體內(nèi)外誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答進行檢測，對重組減毒沙門氏菌DNA菌苗的粘膜免疫效果和霍亂毒素在粘膜免疫中的佐劑作用作初步探討。本研究分兩個部分： 第一部分：觀察弓形蟲主要表面抗原SAG1、SAG2與霍亂毒素A2/B亞基復(fù)合基因真核質(zhì)粒免疫小鼠所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。將SAG1基因、SAG2基因及CTXA2/B基因定向連接插入真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1，經(jīng)酶切及測序，獲得pcDNA3.1-SAG1，，pcDNA3.1-SAG1-SAG2及pcDNA3.1-SAG1-SAG2-CTXA2/B的重組子；將重組真核質(zhì)粒在體外進行初步誘導(dǎo)，脂質(zhì)體Cellfectamine~(TM)2000介導(dǎo)重組真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人宮頸癌細胞系Hela細胞，RT-PCR從轉(zhuǎn)染細胞的RNA中擴增得到單價和多價基因片斷，證實經(jīng)質(zhì)粒載體攜帶的單價和多價基因均已
[Abstract]:At present, after the attenuated or attenuated vaccine, the research on toxoplasmosis vaccine is mainly focused on protein vaccine and nucleic acid vaccine based on protective antigen. As the third generation vaccine after pathogen vaccine, subunit vaccine, nucleic acid vaccine makes the research of Toxoplasma gondii vaccine into a new stage. However, animal and human experiments show that the immunological effect of univalent vaccine is not ideal, and the development of multiple antigen combinations is a development direction and consensus in the research of Toxoplasma gondii vaccine. In addition, in the study of multivalent vaccine, it is a new developing trend to select the polyepitope vaccine containing T lymphocytes and / or B lymphocyte epitopes in some strong protective antigens. In this study, the multivalent and multiepitope DNA vaccine of Toxoplasma gondii was constructed by fusion of the multivalent and multiepitope genes of Toxoplasma gondii with the cholera toxin CTXA 2 / B gene for the first time. DNA vaccine was transported by recombinant attenuated intracellular bacteria (Salmonella typhimurium) through natural mucosal infection to detect the immune response induced by DNA vaccine in vivo and in vitro. The mucosal immunity of recombinant attenuated Salmonella DNA vaccine and the adjuvant effect of cholera toxin in mucosal immunity were studied. This study is divided into two parts: the first part: to observe the eukaryotic plasmid immunization of Toxoplasma gondii main surface antigen SAG1-SAG2 and cholera toxin A2 / B subunit compound gene. Immune response induced by mice. The recombinant plasmid pcDNA3.1-SAG1-SAG1-SAG1-SAG2 and pcDNA3.1-SAG2-CTXA2-CTXA2 / B were obtained by restriction endonuclease digestion and sequencing, and the recombinant eukaryotic plasmids were preliminarily induced in vitro, and the recombinant plasmid was inserted into the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-SAG1-SAG2-CTXA2-CTXA2.The recombinant plasmid was inserted into eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1-SAG1-SAG1-SAG1-SAG2-CTXA2 / B by enzyme digestion and sequencing. The recombinant eukaryotic expression plasmid Cellfectamine ~ (TM) 2000 was transfected into human cervical cancer cell line Hela cell line by RT-PCR. The monovalent and multivalent gene fragments were amplified from the RNA of the transfected cells. It was confirmed that both the univalent and multivalent genes carried by the plasmid vector had been obtained.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2085034