本文選題：人骨髓間充質(zhì)干細胞 + 基質(zhì)細胞衍生因子-1　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 目的: 造血微環(huán)境損傷是引起某些疾病及造血干細胞移植時造血重建不良的重要原因。骨髓基質(zhì)細胞是造血微環(huán)境的主要成分,對造血干/祖細胞的粘附作用是促使造血干/祖細胞回髓定植和進一步增殖分化的基礎(chǔ)。而骨髓間充質(zhì)干細胞( bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是存在于骨髓中除造血干細胞(hemopoietic stem cells,HSCs)以外的另一種干細胞,不僅直接參與生成造血微環(huán)境支持造血,在適宜的條件下還可發(fā)育、分化為具有支持造血功能的多種骨髓基質(zhì)細胞。因其具有高度自我更新能力和多向分化潛能等,是細胞替代和基因治療理想的細胞來源。尤其在造血干細胞移植過程中,可以糾正或改善造血微環(huán)境的損傷,從而促進移植后造血和免疫功能的重建。 基質(zhì)細胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)主要由骨髓基質(zhì)細胞合成和分泌,同時,BMSCs也可合成、分泌SDF-1,是骨髓造血微環(huán)境的重要組成部分。人SDF-1基因定位于10號染色體,根據(jù)其編碼氨基酸序列歸屬于趨化因子CXC亞家族,與其表達于造血干細胞表面的唯一受體CXCR4結(jié)合參與造血的調(diào)控。在造血干細胞動員、歸巢、定植和增殖中發(fā)揮重要作用,并可單獨或協(xié)同G-CSF、TPO等細胞因子通過細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)維持造血干細胞的正常功能。 本實驗在成功分離、培養(yǎng)、鑒定人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMSCs)和構(gòu)建SDF-1-pIRES2-EGFP真核表達載體的基礎(chǔ)上,將重組質(zhì)粒傳染入hBMSCs,并檢測其瞬時轉(zhuǎn)染效率,為進一步的體內(nèi)外實驗研究SDF-1修飾hBMSCs對造血的支持作用奠定基礎(chǔ)。 方法: 一、共采集25例骨髓標本,均取自第三軍醫(yī)大學(xué)附屬新橋醫(yī)院血液科15歲至40歲正常、缺鐵性貧血及特發(fā)性血小板減少性紫癜患者;攜帶SDF-1cDNA的質(zhì)粒pCMV-SPORT6載體購自ATCC公司,Number:47612;pIRES2-EGFP真核表達載體為本實驗室保存。 二、通過密度為1.073kg/L的Percoll液,利用密度梯度離心法分離出人骨髓單個
[Abstract]:Objective: hematopoietic microenvironment injury is an important cause of hematopoietic reconstitution in some diseases and hematopoietic stem cell transplantation. Bone marrow stromal cells are the main components of hematopoietic microenvironment. The adhesion of hematopoietic stem / progenitor cells to hematopoietic stem / progenitor cells is the basis for promoting hematopoietic stem / progenitor cells to be replanted and further proliferated and differentiated. Bone marrow mesenchymal stem cells (bone marrow mesenchymal stem cells) are other stem cells in bone marrow besides hematopoietic stem cells (hemopoietic stem cells). They are not only involved in the generation of hematopoietic microenvironment to support hematopoiesis, but also can be developed under suitable conditions. Differentiation into a variety of bone marrow stromal cells with hematopoietic support. It is an ideal cell source for cell substitution and gene therapy because of its high self-renewal and multi-differentiation potential. Especially in the process of hematopoietic stem cell transplantation, the damage of hematopoietic microenvironment can be corrected or improved, thus promoting the reconstruction of hematopoietic and immune function after transplantation. Stromal cell derived factor 1 (stromal cell derived factor-1 (SDF-1) is mainly synthesized and secreted by bone marrow stromal cells (BMSCs), and BMSCs secrete SDF-1, which is an important part of bone marrow hematopoietic microenvironment. Human SDF-1 gene is located on chromosome 10 and belongs to the chemokine CXC subfamily according to its coding amino acid sequence. The SDF-1 gene binds to CXCR4, the only receptor expressed on the surface of hematopoietic stem cells, involved in the regulation of hematopoiesis. It plays an important role in the mobilization, homing, colonization and proliferation of hematopoietic stem cells, and can maintain the normal function of hematopoietic stem cells by signal transduction system. Based on the successful isolation, culture and identification of human bone marrow mesenchymal stem cells (hBMSCs) and the construction of SDF-1-pIRES2-EGFP eukaryotic expression vector, the recombinant plasmid was infused into hBMSCs and its transient transfection efficiency was measured. It provides a basis for further in vitro and in vivo study on the hematopoietic support of hBMSCs modified with SDF-1. Methods: 1. A total of 25 bone marrow specimens were collected from the Department of Hematology, Xinqiao Hospital affiliated to the third military Medical University. The plasmids pCMV-SPORT6 carrying SDF-1 cDNA were purchased from ATCC company, Number1 47612 pIRES2-EGFP eukaryotic expression vector for preservation in our laboratory, and the eukaryotic expression vector pCMV-SPORT6 containing SDF-1 cDNA was obtained from patients with iron deficiency anemia and idiopathic thrombocytopenic purpura. Secondly, using Percoll solution with density of 1.073 kg / L, a single human bone marrow was isolated by density gradient centrifugation.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R329.2

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本文編號：2083171