本文選題：淋病奈瑟菌 + NspA�。� 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 淋病奈瑟菌是淋病的致病菌。目前,淋病奈瑟菌的耐藥性日趨增強(qiáng),給淋病治療帶來(lái)了困難;已找到的一些淋病奈瑟菌候選疫苗,如Por、Pil、Opa、Los等,都存在不同程度的抗原變異,使淋病疫苗研究產(chǎn)生了障礙,因此人們一直在尋找具有免疫保護(hù)性的保守抗原。1999年P(guān)lante等首先克隆了淋病奈瑟菌的表面蛋白A(Neisseria surface Protein A, NspA)基因,發(fā)現(xiàn)NspA在細(xì)胞表面持續(xù)表達(dá),保守性高,具有較強(qiáng)的免疫原性,是一個(gè)很好的疫苗候選者。本研究著重探討利用NspA真核表達(dá)基因構(gòu)件制備淋病基因疫苗,并試圖利用雌激素建立淋病奈瑟菌小鼠感染模型。 一、淋病奈瑟菌NspA基因的克隆與真核細(xì)胞表達(dá) 根據(jù)淋病奈瑟菌NspA的基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物,以淋病奈瑟菌WHO-A株基因組DNA為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得具有完整開(kāi)放讀碼框(ORF)的NspA抗原基因,將純化后的PCR產(chǎn)物與線性化質(zhì)粒pCMVScript連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和序列分析,證實(shí)所克隆的NspA基因閱讀框架正確,將NspA基因正向插入真核表達(dá)載體pCMVScript的重組質(zhì)粒命名為pcNspA。以脂質(zhì)體包裹重組質(zhì)粒pcNspA轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,用間接免疫熒光檢測(cè),表明轉(zhuǎn)染pcNspA重組質(zhì)粒的COS-7細(xì)胞能瞬時(shí)表達(dá)NspA抗原。 二、小鼠體內(nèi)NspA基因疫苗誘生特異性抗體研究 為進(jìn)一步研究NspA基因疫苗的免疫保護(hù)性,我們將NspA真核細(xì)胞表達(dá)載體通過(guò)三種接種途徑(肌肉注射、滴鼻免疫、陰道接種)免疫6周齡雌性BALB/c小鼠,分別收集小鼠的血清、支氣管肺泡洗液、陰道洗液,用間接ELISA方法檢
[Abstract]:Neisseria gonorrhoeae is the pathogen of gonorrhea. At present, the drug resistance of Neisseria gonorrhoeae is increasing, which makes it difficult to treat gonorrhea. Some candidate vaccines of Neisseria gonorrhoeae, such as Poro Pila Opa-Los, have different degree of antigen variation, which makes the research of gonorrhea vaccine difficult. In 1999, Plante et al first cloned Neisseria surface protein A (NspA) gene from Neisseria gonorrhoeae, and found that NspA was expressed continuously on the cell surface, with high conservation and strong immunogenicity. Is a good vaccine candidate. This study focused on the preparation of gonorrhea gene vaccine using NspA eukaryotic expression gene component, and attempted to use estrogen to establish an infection model of Neisseria gonorrhoeae in mice. First, the cloning of NspA gene from Neisseria gonorrhoeae and the expression of NspA gene in eukaryotic cells were used to design a pair of primers according to the sequence of NspA gene of Neisseria gonorrhoeae. The genomic DNA of Neisseria gonorrhoeae strain WHO-A was used as template. NspA antigen gene with complete open reading frame (ORF) was obtained by PCR amplification. The purified PCR product was ligated with linearized plasmid pCMVScript and transformed into Escherichia coli DH5 偽 strain. The reading frame of the cloned NspA gene was confirmed by restriction endonuclease digestion and sequence analysis. The recombinant plasmid which was inserted into eukaryotic expression vector pCMVScript was named pcNspA. COS-7 cells were transfected with liposome encapsulated recombinant plasmid pcNspA. Indirect immunofluorescence assay showed that COS-7 cells transfected with pcNspA recombinant plasmid could express NspA antigen instantaneously. Second, in order to further study the immune protection of NspA gene vaccine in mice, the specific antibody was induced by NspA gene vaccine in mice. We immunized 6-week-old female BALB / c mice with NspA eukaryotic expression vector by three inoculation routes (intramuscular injection, nasal drip immunization, vaginal inoculation). Serum, bronchoalveolar lavage fluid and vaginal lavage fluid were collected from the mice respectively and detected by indirect Elisa.
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R392;Q789

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