發(fā)布時(shí)間：2018-06-21 20:59

  本文選題：雌激素 + 內(nèi)皮祖細(xì)胞　； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2005年博士論文

【摘要】：第一部分 外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離和培養(yǎng) 目的:研究外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞分離、培養(yǎng)及和鑒定的方法。方法:從年輕志愿者的外周血中用密度梯度離心方法分離出單個(gè)核細(xì)胞,在添加VEGF的M199培養(yǎng)液中培養(yǎng),每隔3～4d換一次液。培養(yǎng)5d后,消化貼壁細(xì)胞,用DiI—ac-LDL及FITC-UEA-1對其進(jìn)行免疫熒光分析。結(jié)果:培養(yǎng)3～4d單核細(xì)胞開始貼壁,14d左右開始出現(xiàn)索條狀結(jié)構(gòu),免疫熒光鑒定顯示90%的貼壁細(xì)胞呈雙熒光染色陽性。結(jié)論:外周血中富含內(nèi)皮祖細(xì)胞,在一定的培養(yǎng)條件下,可分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞。 第二部分 雌激素對內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖和遷移作用的影響 目的 研究雌激素對內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖及遷移的影響及細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間和雌激素濃度對其影響,并研究雌激素作用下細(xì)胞周期變化和促細(xì)胞增殖和遷移的細(xì)胞表面抗原VE-cadherin,Flt-1和KDR mRNA和蛋白水平的變化。方法 從年輕志愿者的外周血分離出單個(gè)核細(xì)胞,在內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng),誘導(dǎo),分化出內(nèi)皮祖細(xì)胞。取培養(yǎng)7d的EPCs,并分別加入不同濃度(0,10~(-6)mol/L,10~(-7)mol/L,10~(-8)mol/L,10~(-9)mol/L或10~(-10)mol/L)的17β—雌二醇作用24h后,進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)分析(MTS)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),觀察不同濃度雌激素對內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖及遷移能力的影響。分別取4×10~5培養(yǎng)5d,7d,9d,13d,20d的內(nèi)皮祖細(xì)胞,加入10~(-8)mol/L雌激素作用24小時(shí),消化貼壁細(xì)胞并在顯微鏡下計(jì)數(shù)。分別取培養(yǎng)5d,7d,9d,13d的內(nèi)皮祖細(xì)胞,加入10~(-8)mol/L的雌激素作用24h后檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞在細(xì)胞周期各時(shí)相的分布,進(jìn)一步研究雌激素對細(xì)胞增殖的影響。分別取培養(yǎng)5d,7d,9d,13d的內(nèi)皮祖細(xì)胞,加入10~(-8)mol/L的雌激素作用24h后,分別用Real-time和流式細(xì)胞技術(shù)檢測內(nèi)皮細(xì)胞表面特異性抗原Flt-1,KDR和VE-cadherin mRNA和蛋白水平表達(dá)的變化。結(jié)果 增殖實(shí)驗(yàn)MTS分析表明雌激素能顯著增強(qiáng)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖活性,雌激素濃度為10~(-8)mol/L—10~(-9)mol/L時(shí),增殖活性最強(qiáng)。手工計(jì)數(shù)內(nèi)皮祖細(xì)胞顯示雌激素作用后內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)目顯著增多,8-10d的內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖活性達(dá)到高峰。遷移實(shí)驗(yàn)也表明雌激素能夠促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移,雌激素濃度
[Abstract]:Part I isolation and culture of endothelial progenitor cells from peripheral blood objective: to study the methods of isolation, culture and identification of endothelial progenitor cells in peripheral blood. Methods: mononuclear cells were isolated from the peripheral blood of young volunteers by density gradient centrifugation. The mononuclear cells were cultured in M199 medium supplemented with VEGF. After 5 days of culture, adherent cells were digested and immunofluorescence analysis was performed with DiI-ac-LDL and FITC-UEA-1. Results: after 3 days of culture, mononuclear cells began to adhere to the wall for 14 days. The immunofluorescence analysis showed that 90% of the adherent cells were double fluorescent staining positive. Conclusion: the peripheral blood is rich in endothelial progenitor cells and can differentiate into endothelial like cells under certain culture conditions. Part II effects of estrogen on proliferation and migration of endothelial progenitor cells objective to study the effects of estrogen on proliferation and migration of endothelial progenitor cells The effect of cell culture time and estrogen concentration on it, The changes of cell cycle and VE-cadherin1 and KDR mRNA and protein levels were studied. Methods Mononuclear cells were isolated from the peripheral blood of young volunteers, cultured in endothelial cells, induced and differentiated into endothelial progenitor cells. EPCs were cultured for 7 days and were treated with 17 尾 -estradiol (17 尾 -estradiol / L) at different concentrations of 10 ~ (-6) mol / L ~ (-10) ~ (-7) mol / L ~ (10) ~ (-8) mol / L ~ (-1) ~ (-10) mol / L) for 24 hours. Cell proliferation assay was performed to analyze the effects of different concentrations of estrogen on the proliferation and migration of endothelial progenitor cells (EPCs). Endothelial progenitor cells (EPCs) cultured at 4 脳 10 ~ 5 for 5 d ~ 7 d ~ 9 d ~ (13) d ~ (-1) for 20 d were treated with 10 ~ (-8) mol / L estrogen for 24 h, then the adherent cells were digested and counted under microscope. Endothelial progenitor cells (EPCs) were cultured for 5 d, 7 d, 9 d and 13 d, respectively. The distribution of endothelial progenitor cells (EPCs) in each phase of cell cycle was detected after 24 hours of treatment with 10 ~ 8mol / L estrogen, and the effect of estrogen on cell proliferation was further studied. Endothelial progenitor cells (EPCs) were cultured for 5 d, 7 d, 9 d and 13 d, respectively. The expression of VEGF mRNA and VE-cadherin mRNA and protein were detected by Real-time and flow cytometry, respectively. Results the results of MTS analysis showed that estrogen could significantly enhance the proliferation of endothelial progenitor cells. When the concentration of estrogen was 10 ~ (-8) mol / L ~ (-9) mol / L, the proliferative activity was the highest. Manual counting of endothelial progenitor cells showed that the number of endothelial progenitor cells increased significantly after estrogen treatment, and the proliferation activity of endothelial progenitor cells reached the peak after 8-10 days. The migration experiment also showed that estrogen could promote the migration of endothelial progenitor cells and the concentration of estrogen.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2049987