本文選題：miRNAs + 腸道病毒型��； 參考：《生物工程學報》2014年06期

【摘要】：研究發(fā)現(xiàn)microRNAs(miRNAs)可以參與調(diào)控病毒在宿主細胞內(nèi)感染和復(fù)制的過程。為了揭示miRNAs是否參與腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的感染與復(fù)制,研究了miRNAs對EV71病毒在宿主細胞內(nèi)復(fù)制的影響。構(gòu)建miRNAs靶基因篩選系統(tǒng),在雙熒光素酶報告體系的pMIR載體插入病毒基因,如果插入的基因序列能被細胞內(nèi)的miRNAs靶向調(diào)控,報告基因的表達將發(fā)生變化。實驗發(fā)現(xiàn)EV71病毒5′-UTR基因可能是miRNAs的作用靶標。隨后利用miRNAs在線分析軟件預(yù)測并驗證可能作用于5′-UTR基因片段的miRNAs。為了研究miRNAs分子對5′-UTR基因的調(diào)控作用是否可以體現(xiàn)在EV71病毒的復(fù)制過程中,在人橫紋肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RD)細胞中轉(zhuǎn)染miRNAs mimics,利用Western blotting和real-time PCR實驗檢驗EV71病毒的復(fù)制和表達情況。實驗結(jié)果表明,miR373和miR542-5p可以通過作用于EV71病毒5′-UTR基因從而抑制病毒在RD細胞中的復(fù)制和表達。細胞內(nèi)miR373和miR542-5p可以調(diào)控EV71在宿主細胞中的復(fù)制過程。研究EV71病毒與宿主miRNAs的相互作用機制為進一步闡明EV71病毒感染與復(fù)制機理奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:It has been found that microRN AsmiRNAscan be involved in the regulation of virus infection and replication in host cells. To investigate whether miRNAs are involved in the infection and replication of enterovirus 71 (EV71), the effects of miRNAs on the replication of EV71 virus in host cells were studied. The target gene screening system of miRNAs was constructed and inserted into the pMIR vector of the double luciferase report system. If the inserted gene sequence can be targeted by the intracellular miRNAs, the expression of the reporter gene will change. It was found that 5-UTR gene of EV71 virus may be the target of miRNAs. Then miRNAs were predicted and verified by using the online analysis software of miRNAs. In order to investigate whether the regulation of miRNAs on 5G-UTR gene can be reflected in the replication of EV71 virus, miRNAs mimicswere transfected into human rhabdomyosarcoma (Rhabdomyosarcoma) cells. Western blotting and real-time PCR experiments were used to detect the replication and expression of EV71 virus. The results showed that miR373 and miR542-5p could inhibit the replication and expression of EV71 virus in Rd cells by acting on the 5-UTR gene of EV71 virus. Intracellular miR373 and miR542-5p can regulate the replication of EV71 in host cells. The study of the interaction mechanism between EV71 virus and host miRNAs lays a foundation for further elucidating the mechanism of EV71 virus infection and replication.
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所;中國科學院微生物研究所病原微生物與免疫學重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(No.31370201)資助~~
【分類號】：R3416

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本文編號：2010938