本文選題：neuritin + 基因表達(dá)�。� 參考：《石河子大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的:(1)檢測(cè)neuritin在人類部分細(xì)胞株中的表達(dá)情況,篩選neuritin高表達(dá)和低表達(dá)細(xì)胞株;(2)探討neuritin過表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖、遷移的影響。 方法:(1)分別采用RT-PCR與免疫組織化學(xué)技術(shù)在mRNA水平及蛋白水平,檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)存11種人類正常和腫瘤細(xì)胞株中neuritin的表達(dá)情況;(2)擴(kuò)增neuritin ORF,克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1myc/his(-)A中,經(jīng)轉(zhuǎn)化、篩選、測(cè)序鑒定后,抽提并獲取高純度的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)A-neuritin,采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)染neuritin低表達(dá)細(xì)胞株,RT-PCR及western-blot鑒定轉(zhuǎn)染效果后,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)neuritin的細(xì)胞;(3)通過MTT比色和細(xì)胞計(jì)數(shù)分析neuritin過表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響,通過觀察細(xì)胞形態(tài)變化和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)探討neuritin過表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移的影響。 結(jié)果:(1)通過RT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè),篩選出neuritin高表達(dá)細(xì)胞株293T、hUVEC、hUASMC、Soas-2、LOVO、L-02及低表達(dá)細(xì)胞株BMSCs、Hela、ECV-304、SK、QGY;(2)構(gòu)建了neuritin的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)A-neuritin,經(jīng)BamHⅠ+EcoRⅠ雙酶切鑒定和測(cè)序鑒定證實(shí)neuritin基因已正確插入多克隆位點(diǎn);(3)pcDNA3.1(-)A-neutitin轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)后,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)neuritin的BMSCs;(4)鏡下觀察:neuritin過表達(dá)使BMSCs形態(tài)變得不規(guī)則,多偽足,且部分細(xì)胞偽足似絲狀,更為細(xì)長(zhǎng);(5)MTT和細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示:neuritin過表達(dá)與BMSCs的數(shù)目呈負(fù)相關(guān);(6)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)顯示:neuritin過表達(dá)對(duì)BMSCs的遷移有促進(jìn)作用。 結(jié)論:(1)篩選出neuritin高表達(dá)及低表達(dá)細(xì)胞株,發(fā)現(xiàn)neuritin不僅在多種正常細(xì)胞中有表達(dá),而且在部分腫瘤細(xì)胞中也有表達(dá);(2)構(gòu)建了pcDNA3.1(-)A-neutitin真核表達(dá)系統(tǒng),并獲得穩(wěn)定表達(dá)neuritin的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;(3)neuritin過表達(dá)與BMSCs的數(shù)目呈負(fù)相關(guān),可能與細(xì)胞增殖無(wú)關(guān);(4)neuritin過表達(dá)使BMSCs出現(xiàn)偽足的自主性生長(zhǎng),并能促進(jìn)細(xì)胞的遷移;(5)neuritin過表達(dá)使部分BMSCs的形態(tài)出現(xiàn)類神經(jīng)元樣改變,可能與細(xì)胞的分化相關(guān)。
[Abstract]:Objective : ( 1 ) To investigate the expression of neurites in human partial cell lines , to screen high - expression and low - expression cell lines of neurites , and ( 2 ) to investigate the effect of overexpression of neurites on cell proliferation and migration .






Methods : ( 1 ) The expression of neurites in 11 human normal and tumor cell lines was detected by RT - PCR and immunohistochemistry .






Results : ( 1 ) The eukaryotic expression recombinant plasmid pcDNA3.1 ( - ) A - neurites was screened by RT - PCR and immunohistochemistry . The eukaryotic expression recombinant plasmid pcDNA3.1 ( - ) A - neurites was constructed .






Conclusion : ( 1 ) The high - expression and low - expression cell lines of neurites were screened . It was found that neurites were not only expressed in a variety of normal cells but also in some tumor cells . ( 2 ) The eukaryotic expression system of pcDNA3.1 ( - ) A - neutitin was constructed .
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2004776