發(fā)布時間：2018-06-08 16:43

  本文選題：益生菌 + 粘附��； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學》2005年碩士論文

【摘要】：本試驗以青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌為對象,對益生菌在機體腸道內的粘附定植以及提高免疫功能的機理進行了研究,目的在于尋找出益生菌產(chǎn)生粘附作用的物質,以及在腸道細胞上的粘附素受體,以及益生菌產(chǎn)生免疫促進作用成分。 雙歧桿菌和乳桿菌都屬于革蘭氏陽性菌。革蘭氏陽性菌菌體細胞壁表面主要由肽聚糖(Peptidoglycan,PG)、多糖(Polysaccharide,Ps)和表層蛋白質(S-層蛋白,Surface-Layerprotein,S-layerprotein,SLP)組成,這些物質在益生菌菌體與宿主腸道細胞的粘附過程中直接或間接的起到不同程度的作用。 本實驗對益生菌粘附機理的研究主要集中在于菌體代謝產(chǎn)物和細胞表層成分,即肽聚糖和表層的蛋白質。實驗中首先用TritonX-100結合胰蛋白酶、DNA酶、RNA酶和蛋白酶E的方法,對青春雙歧桿菌菌體細胞壁所含的完整肽聚糖進行提取;采用十二烷基硫酸鈉(sDS)結合胰蛋白酶、三氯乙酸處理的方法提取嗜酸乳桿菌菌體細胞壁所含肽聚糖,并確定了最適的提取條件為用質量濃度為80g/L的十二烷基硫酸鈉,沸水浴處理10min,然后用胰蛋白酶和三氯乙酸連續(xù)處理;同時對提取物進行蛋白質含量的測定和氨基酸分析,以確定提取過程是否真正有效的去除了受試菌株菌體內含有的蛋白質。 通過不同方法分別對受試菌株代謝產(chǎn)物、菌體表面成分以及腸道細胞表面物質在粘附過程中的作用進行了研究。確定青春雙歧桿菌的粘附素為菌體分泌到培養(yǎng)基中的一種蛋白質,腸道上皮細胞對青春雙歧的粘附素受體為細胞表面的一種糖蛋白;嗜酸乳桿菌的粘附素是菌體細胞壁上的一種蛋白質,其在腸道上皮細胞上的粘附受體為蛋白。 實驗中還對滅活青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌菌株的粘附能力進行了初步研究,發(fā)現(xiàn)經(jīng)熱處理失活后的青春雙歧桿菌依然具有粘附能力,而且并未受到明顯影響;而嗜酸乳桿菌在經(jīng)過熱處理后,則基本喪失粘附能力。 提高機體免疫力是益生菌的主要功效之一。本實驗以昆明小鼠為對象進行動物實驗,檢測青春雙歧桿菌與嗜酸乳桿菌細胞壁肽聚糖促進免疫功能的作用。結果顯示,與對照樣本相比,接受菌液注射和肽聚糖注射都會對受試動物的免疫指標產(chǎn)生影響,其血清中自介素IL-6水平、血清溶菌酶活力、腹腔巨噬細胞數(shù)量、巨噬細胞吞噬能力都得到明顯提高,說明細胞壁肽聚糖對機體免疫功能具有明顯促進作用。
[Abstract]:In this study, Bifidobacterium pubertii and Lactobacillus acidophilus were used to study the adhesion and colonization of probiotics in the intestinal tract and the mechanism of improving immune function. Bifidobacterium and Lactobacillus belong to Gram-positive bacteria. The cell wall surface of Gram-positive bacteria is mainly composed of peptidoglycanine (PGN), polysaccharide (PS) and surface-Layer protein (SLP). These substances directly or indirectly play an important role in the adhesion of probiotic bacteria to intestinal cells. In this study, the adhesion mechanism of probiotics was mainly focused on the metabolites of probiotics and the surface components of the cells. That is, peptidoglycan and surface protein. In the experiment, the intact peptidoglycan contained in cell wall of bifidobacterium pubescens was extracted by Triton X-100 binding trypsin DNA enzyme and protease E. Sodium dodecyl sulfate combined with trypsin was used to extract peptidoglycan from the cell wall of Bifidobacterium pubescens. The peptidoglycan from the cell wall of Lactobacillus acidophilus was extracted by trichloroacetic acid, and the optimum extraction conditions were determined as follows: sodium dodecyl sulfate, 80 g / L mass concentration, The extract was treated with trypsin and trichloroacetic acid for 10 min, and the protein content and amino acid were determined. In order to determine whether the extraction process is really effective in removing the protein contained in the tested strain, the metabolites of the tested strain were obtained by different methods. The effects of bacterial surface composition and intestinal cell surface material on adhesion were studied. The adhesion factor of bifidobacterium pubertidis was identified as a protein secreted into the culture medium, and the adhesin receptor of intestinal epithelial cells to the bifidobacterium was identified as a glycoprotein on the cell surface. The adhesion hormone of Lactobacillus acidophilus is a protein in the cell wall of Lactobacillus acidophilus. Its adhesion receptor on intestinal epithelial cells was protein. The adhesion ability of inactivated bifidobacterium and Lactobacillus acidophilus strains were also studied. It was found that Bifidobacterium pubertifolia after heat treatment still had adhesion ability and was not significantly affected, while Lactobacillus acidophilus was not affected after heat treatment. Improving immunity is one of the main effects of probiotics. The effects of peptidoglycan on cell wall of Bifidobacterium puberty and Lactobacillus acidophilus were studied in Kunming mice. The results showed that, compared with the control sample, inoculation of bacterial fluid and peptidoglycan had an effect on the immune indexes of the tested animals. The serum levels of IL-6, lysozyme activity and the number of peritoneal macrophages were determined. Phagocytosis of macrophages was improved obviously, which indicated that peptidoglycan could promote immune function.
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R392

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