本文選題：NADPH氧化酶 + NF-κB�。� 參考：《中國病理生理雜志》2014年10期

【摘要】：目的:構(gòu)建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端啟動子區(qū)的pGL3螢光素酶報告基因載體及缺失NF-κB結(jié)合元件的相應(yīng)載體,分別測定其相應(yīng)活性,探討NF-κB結(jié)合元件缺失對NOX1啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法:采用PCR法克隆NOX1啟動子區(qū)序列(1 415 bp),將目的片段與pGL3螢光素酶載體分別雙酶切、純化后進行連接(pGL3-NOX1-1415),測序鑒定;應(yīng)用Alibaba 2.1軟件分析NOX1近端啟動子區(qū),獲取NF-κB結(jié)合元件;重疊PCR法將含該元件的啟動子區(qū)域(88 bp)缺失,并構(gòu)建相應(yīng)載體(pGL3-NOX1-1327)。將兩載體分別與pRL-TK內(nèi)參質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染進入A549細(xì)胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激細(xì)胞24 h,螢光酶標(biāo)儀檢測A549細(xì)胞的螢光素酶活性。結(jié)果:測序鑒定結(jié)果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB結(jié)合元件缺失的pGL3-NOX1-1327載體構(gòu)建成功;細(xì)胞實驗顯示,TNF-α刺激后,轉(zhuǎn)染pGL3-NOX1-1415的A549細(xì)胞螢光素酶活性明顯強于對照組(P0.05),而轉(zhuǎn)染NF-κB結(jié)合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的細(xì)胞螢光素酶活性明顯低于轉(zhuǎn)染pGL3-NOX1-1415組(P0.05)。結(jié)論:TNF-α誘導(dǎo)A549細(xì)胞NOX1基因活化與NF-κB密切相關(guān),NF-κB參與了TNF-α誘導(dǎo)的NOX1基因啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
[Abstract]:AIM : To construct the expression vector of pGL3 luciferase reporter gene containing NADPH oxidase 1 ( NOX1 ) proximal promoter region and the corresponding vector of deletion of NF - 魏B binding element , and to investigate the effect of deletion of NF - 魏B binding element on the transcriptional activity of NOX1 promoter region .
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科;廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81070003;No.81370173) 國家自然青年科學(xué)基金資助項目(No.81200002) 福建省衛(wèi)生廳青年科研課題資助項目(No.2013-2-51) 福建省中青年教師教育科研項目(No.JB13085)
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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7 段翌;外源性肺表面活性物質(zhì)替代治療技術(shù)在晚期早產(chǎn)兒急性呼吸衰竭中的應(yīng)用[D];青島大學(xué);2012年

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10 馬明生;缺血后處理對再灌注損傷鼠肺NF-κB和TNF-α mRNA表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

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3 鄧楊梅;謝強敏;平燕婷;;急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征治療藥物的研究進展[J];世界臨床藥物;2006年01期

4 孫元瑩;李志軍;王今達(dá);;大承氣湯與多臟器功能障礙綜合征[J];遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年02期

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6 朱云喜,梁繼河,李琦,羅新林;TNF-α和IL-8在兔創(chuàng)傷性急性肺損傷中的意義[J];免疫學(xué)雜志;1997年03期

7 顧興;金發(fā)光;傅恩清;李學(xué)英;劉靜莉;孫亞妮;;細(xì)胞因子在ARDS發(fā)病機制中的作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2007年09期

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10 張宏偉;潘靈輝;;急性肺損傷與細(xì)胞因子平衡的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年23期

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3 羅新梅,陳宏;黑曲霉(Aspergillus niger)啟動子的克隆及其序列特征[J];遺傳學(xué)報;1999年04期

4 洪源,成軍;乙型肝炎病毒表面抗原基因啟動子Ⅰ結(jié)合蛋白1的基因克隆化研究[J];世界華人消化雜志;2004年01期

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8 呂杰;趙瑩子;黃玉屏;沈萍;陳向東;;嗜鹽古生菌Haloarcula hispanica淀粉酶基因啟動子的研究及其跨域表達(dá)載體的構(gòu)建[A];基因開啟未來：新時代的遺傳學(xué)與科技進步——湖北省遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2009年

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10 黃百渠;曾慶華;呂延成;孫迎春;;組蛋白和轉(zhuǎn)錄因子在hAMRF基因啟動子上的相互作用及對轉(zhuǎn)錄的影響[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

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2 錢錚;人類DNA上啟動子數(shù)量可能超過19萬個[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 ;兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡中白細(xì)胞介素－10啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性對自身表達(dá)水平的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

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1 楊予濤;一個光合組織特異表達(dá)啟動子的克隆、功能分析及其轉(zhuǎn)錄因子的鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 楊曉敏;環(huán)加氧酶-2啟動子區(qū)抑制性結(jié)合蛋白的鑒定和功能分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

3 柳小慶;玉米胚特異性高表達(dá)啟動子的基因組規(guī)模篩選、克隆和功能鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

4 陸超;人CD2AP基因啟動子的鑒定及其功能研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

5 宋斐;胚乳特異性ALP type-B基因啟動子的克隆及其功能分析[D];華中科技大學(xué);2012年

6 姜安麗;人同源盒基因NKX3.1啟動子的克隆及其調(diào)控區(qū)的鑒定[D];山東大學(xué);2005年

7 岳揚波;AAV-2 P5啟動子功能的分子基礎(chǔ)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

8 聶秀玲;化學(xué)誘導(dǎo)啟動子的克隆、定點突變及功能分析[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

9 卜友泉;NFBD1啟動子克隆、鑒定、轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及其在細(xì)胞生長、凋亡中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

10 婁桂予;人法尼酯X受體基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

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1 何文s，

本文編號：1986077