本文選題：嚴(yán)重急性呼吸窘迫綜合征病毒(SARS-CoV) + 刺突蛋白(S蛋白)　； 參考：《中國(guó)病毒學(xué)》2005年05期

【摘要】：為了表達(dá)SARS-CoV的S蛋白的受體結(jié)合區(qū)并對(duì)其免疫原性進(jìn)行分析,用PCR方法擴(kuò)增S蛋白的受體結(jié)合區(qū)基因片段,克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a+并在大腸桿菌中表達(dá),應(yīng)用Western-blot鑒定表達(dá)的目的蛋白,而后以該蛋白作為診斷抗原包被酶聯(lián)板來(lái)檢測(cè)20份SARS病人血清和28份健康人血清,結(jié)果原核表達(dá)的S蛋白能夠和所用的SARS病人血清反應(yīng)。這提示表達(dá)的S重組蛋白具有良好的抗原性。將變性純化的重組蛋白和復(fù)性蛋白分別皮下免疫小鼠,第三次免疫一周后收集抗血清,用ELISA測(cè)定抗體和同時(shí)測(cè)定中和抗體活性。用變性的抗原免疫的小鼠血清均無(wú)中和活性;而用復(fù)性的蛋白免疫的小鼠產(chǎn)生了中和抗體。實(shí)驗(yàn)表明,S蛋白受體結(jié)合區(qū)無(wú)線性中和表位,中和抗體的產(chǎn)生是由構(gòu)象表位誘導(dǎo)的。提示該蛋白有可能應(yīng)用于亞單位疫苗的研究。
[Abstract]:In order to express the receptor binding region of S protein of SARS-CoV and analyze its immunogenicity, the receptor binding region of S protein was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression plasmid pET-32a and expressed in Escherichia coli. Western-blot was used to identify the expressed target protein, and then the protein was coated with enzyme linked plate as diagnostic antigen to detect 20 sera of SARS patients and 28 healthy people. The results showed that the expressed S protein could react with the serum of SARS patients. This suggests that the expressed S recombinant protein has good antigenicity. The purified recombinant protein and renatured protein were immunized subcutaneously respectively. The antiserum was collected one week after the third immunization. The antibody and neutralizing antibody activity were determined by ELISA. Mice immunized with denatured antigens had no neutralization activity, while mice immunized with renatured proteins produced neutralizing antibodies. The results showed that the production of neutralizing antibodies was induced by conformational epitopes. The results suggest that this protein may be used in the study of subunit vaccine.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河北醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)教研室 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
【基金】：北京科委中英SARS免疫病理學(xué)研究課題(H030230100130)
【分類(lèi)號(hào)】：R392;

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 祝慶余 ,秦鄂德,于曼,司炳銀,楊保安,劉洪,呂富雙,常國(guó)輝,彭文明,范寶昌,鄧永強(qiáng),韓偉國(guó),石玉玲,李林海,張泮河,趙秋敏,曹務(wù)春;新分離的冠狀病毒與嚴(yán)重急性呼吸綜合征病原關(guān)系的研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2003年06期

2 ;A complete sequence and comparative analysis of a SARS-associated virus(Isolate BJ01)[J];Chinese Science Bulletin;2003年10期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曾星,李恩江;從SARS論文的組稿看編輯的信息意識(shí)[J];編輯學(xué)報(bào);2004年03期

2 朱焱;李卡;郭瀛軍;孫樹(shù)漢;;乙肝病毒X蛋白HLA-A0201限制性CTL表位的篩選與鑒定[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年11期

3 ;Complete Genome Sequences of the SARS-CoV: the BJ Group (Isolates BJ01-BJ04)[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2003年03期

4 ;The C-Terminal Portion of the Nucleocapsid Protein Demonstrates SARS-CoV Antigenicity[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2003年03期

5 ;The Epitope Study on the SARS-CoV Nucleocapsid Protein[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2003年03期

6 ;A Strategy for Searching Antigenic Regions in the SARS-CoV Spike Protein[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2003年03期

7 ;Genome Organization of the SARS-CoV[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2003年03期

8 陳悅青,錢(qián)汶,毛子安;SARS—CoV基因組全序列特點(diǎn)及意義[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè);2004年03期

9 司炳銀 ,楊保安 ,于曼 ,劉洪 ,呂富雙 ,韓偉國(guó) ,張雨 ,石玉玲 ,李林海 ,秦鄂德 ,祝慶余;SARS病毒抗體間接免疫熒光檢測(cè)方法的建立[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2003年08期

10 鄒正升,楊永平,陳菊梅,辛紹杰,張偉,周先志,胡良平;嚴(yán)重急性呼吸綜合征臨床分期與分型特點(diǎn)及其意義探討[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2003年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 陳玲玲;原核與真核生物蛋白質(zhì)編碼區(qū)識(shí)別及基因組分析[D];天津大學(xué);2004年

2 王寶梅;SARS冠狀病毒S蛋白HLA-A～*0201限制性CD8～+T淋巴細(xì)胞表位的鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 陳華標(biāo);SARS冠狀病毒特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 陳蘇紅;四種重要傳染病病原體檢測(cè)新技術(shù)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

5 劉懷然;SARS冠狀病毒S糖蛋白基因片段的表達(dá)及初步應(yīng)用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 熊偉;病毒疫苗微膠囊化技術(shù)平臺(tái)的建立及應(yīng)用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

7 孫立;抗戾飲對(duì)呼吸道冠狀病毒感染模型影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

8 賀莉;SARS病原體原位檢測(cè)及發(fā)病機(jī)制研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張?jiān)i;趨化因子類(lèi)病毒受體的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 王超;SARS冠狀病毒免疫增強(qiáng)型核酸疫苗構(gòu)建及免疫效果評(píng)價(jià)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 李佳明;抗SARS-CoV單克隆抗體的鑒定及應(yīng)用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

4 何濤;SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)、純化和鑒定及中國(guó)家養(yǎng)果子貍類(lèi)SARS-CoV病毒的血清學(xué)檢測(cè)[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2005年

5 彭宇;SARS冠狀病毒N蛋白與病毒前導(dǎo)RNA相互作用的初步研究[D];武漢大學(xué);2005年

6 王陸寶;SARS-CoV S、N、E和M DNA免疫的細(xì)胞免疫應(yīng)答[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

7 馬翠卿;SARS-CoV S蛋白受體結(jié)合區(qū)的重組表達(dá)及免疫原性分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

8 趙卓;SARS冠狀病毒BJ01株全長(zhǎng)cDNA的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)錄體感染性觀察[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

9 李娟;利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)SARS-CoV和流感病毒的蛋白[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2007年

10 張玲;蝙蝠ACE2與SARS-CoV S蛋白相互作用的關(guān)鍵氨基酸鑒別[D];黑龍江大學(xué);2010年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王翠娥 ,秦鄂德,甘永華,李豫川,吳小紅,曹軍田,于曼,司炳銀,嚴(yán)格,李金風(fēng),祝慶余;非典型肺炎標(biāo)本感染乳鼠和Vero E6細(xì)胞的病理學(xué)觀察[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2003年05期

2 秦鄂德,祝慶余,彭文明,姜濤,范寶昌,常國(guó)輝,于曼,司炳銀,劉伯華,鄧永強(qiáng),劉洪,張雨;重癥急性呼吸綜合征病例尸解肺組織中新型冠狀病毒部分聚合酶基因的序列測(cè)定[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2003年02期

3 祝慶余,秦鄂德,王翠娥,于曼,司炳銀,范寶昌,常國(guó)輝,彭文明,楊保安,姜濤,李豫川,鄧永強(qiáng),劉洪,甘永華;非典型肺炎病例標(biāo)本中新型冠狀病毒的分離與鑒定[J];中國(guó)生物工程雜志;2003年04期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李穎;載脂蛋白B-100受體結(jié)合區(qū)和FDB研究進(jìn)展[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;1999年09期

2 俞賢明,李載平;帶肝細(xì)胞受體結(jié)合區(qū)的乙型肝炎病毒表面抗原蛋白性質(zhì)的研究——形成表面抗原顆粒和在不同細(xì)胞中的分泌[J];中國(guó)科學(xué)B輯;1992年03期

3 張小萍,王靖雪,郭波,魏靜,吳玉章;酵母呈現(xiàn)SARS冠狀病毒S蛋白受體結(jié)合區(qū)及其鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2005年05期

4 葛猛;徐俊杰;于少洋;董大勇;李冠霖;趙劍;付玲;陳薇;;炭疽保護(hù)性抗原受體結(jié)合區(qū)的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)分析[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年11期

5 李偉;;酸性成纖維細(xì)胞因子的研究進(jìn)展[J];科技信息;2010年22期

6 萬(wàn)忠海,王景林,江禹,劉曉明,何暢,朱平;綠膿桿菌外毒素A受體結(jié)合區(qū)蛋白基因重組與鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2002年06期

7 費(fèi)小戰(zhàn);盧海松;郭紅燕;譚亞娣;陳煥春;郭愛(ài)珍;;SARS冠狀病毒刺突蛋白S144-643的表達(dá)及免疫原性分析[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年01期

8 謝力;肖文s，

本文編號(hào)：1985404