本文選題：人免疫缺陷病毒(HIV) + 整合酶��； 參考：《生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展》2014年05期

【摘要】：HIV-1整合酶是目前抗艾滋病藥物研發(fā)的重要靶點(diǎn)之一,整合酶的耐藥突變是導(dǎo)致整合酶抑制劑類藥物治療失敗的主要原因,但突變產(chǎn)生耐藥性的機(jī)理仍不清楚.本工作通過人工構(gòu)建突變型整合酶,測試其活性和耐藥性,對整合酶的耐藥機(jī)理進(jìn)行初步探索.構(gòu)建整合酶的突變型包括E92A、N155S兩種單突變及E92A/N155S雙突變.通過基因工程操作引入突變、構(gòu)建質(zhì)粒、表達(dá)純化得到整合酶蛋白.用基于磁珠的整合酶鏈轉(zhuǎn)移ELISA測試整合酶的鏈轉(zhuǎn)移活性,用S-1360和Raltegravir兩種抑制劑測試整合酶的耐藥性.另外,用Autodock軟件做了S-1360和整合酶核心區(qū)(包括野生型和突變型)的分子對接.結(jié)果表明,N155S突變使整合酶鏈轉(zhuǎn)移活性下降約80%,而E92A/N155S雙突變僅使活性下降約42%,這表明N155S突變基礎(chǔ)上的E92A突變可使整合酶的活性大幅回復(fù).E92A和E92A/N155S對不同的抑制劑可產(chǎn)生不同的耐藥性,它們對Raltegravir的耐藥性強(qiáng)于對S-1360.突變對整合酶活性和耐藥性的影響主要是通過改變整合酶活性中心結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)的,E92A突變可能導(dǎo)致其與周圍殘基靜電相互作用減弱,間接影響到D64和D116殘基,產(chǎn)生活性回復(fù)作用.
[Abstract]:HIV-1 integrase is one of the important targets in the research and development of anti-AIDS drugs. The drug resistance mutation of integrase is the main cause of the failure of integrase inhibitors, but the mechanism of drug resistance is still unclear. In this work, mutant integrase was constructed, its activity and drug resistance were tested, and the mechanism of drug resistance of integrase was preliminarily explored. The mutants of integrase include E92An155S and E92A / N155S double mutations. The plasmids were constructed by introducing mutagenesis into gene engineering, and the integrase protein was obtained by expression and purification. The chain transfer activity of integrase was tested by magnetic bead based integrase chain transfer Elisa, and the resistance of integrase was tested by S-1360 and Raltegravir inhibitors. In addition, the molecular docking between S-1360 and integrase core (including wild type and mutant type) was performed with Autodock software. The results showed that the N155S mutation reduced the activity of integrase chain transfer by about 80%, while the double mutation of E92A / N155S decreased the activity only about 42%, which indicated that the E92A mutation based on the N155S mutation could significantly restore the activity of integrase. E92A and E92A / N155S could produce different inhibitors. Different drug resistance, They are more resistant to Raltegravir than to S-1360. The effect of mutagenesis on integrase activity and drug resistance is mainly due to the change of the structure of integrase active center, which may lead to the weakening of electrostatic interaction between the mutant and the surrounding residues, which indirectly affects the D64 and D116 residues and produces an active recovery effect.
【作者單位】： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31100523,21173014,31171267) 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)資助項(xiàng)目(2009CB930203) 科技部國際合作資助項(xiàng)目(2010DFA31710) 北京市教委面上項(xiàng)目(KM201310005030)~~
【分類號】：R373

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本文編號：1981678