本文選題：CD40配體 + 異亮氨酸拉鏈　； 參考：《蘇州大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：CD40配體(CD40 ligand,CD40L)通過與其受體CD40的相互作用在T細(xì)胞依賴的體液和細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要的作用。本實(shí)驗(yàn)克隆了CD40L胞外功能區(qū)(E107-L261)基因,并在其N端融合了異亮氨酸拉鏈(isoleucine zipper,IZ)促使其形成三聚體活性形式,同時(shí)為了后期純化的需要,在IZ的N端融合6個His,將所融合得到的IZ-CD40L克隆進(jìn)入pET30a表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)表達(dá)體系進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。結(jié)果表明,重組蛋白IZ-CD40L以包涵體形式在大腸桿菌(BL21)中得到較高水平的表達(dá)。通過蛋白的變性、復(fù)性和HiTrap~(TM)親和層析獲得了純度達(dá)95%以上的IZ-CD40L重組蛋白。經(jīng)凝膠過濾層析和非還原SDS-PAGE分析,驗(yàn)證了其確系三聚體形式。激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,重組蛋白IZ-CD40L可與多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株XG2表面CD40分子結(jié)合,并促使其在膜表面發(fā)生聚集。體外活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,重組蛋白IZ-CD40L可有效促使Dentritic cell(DC)成熟,表現(xiàn)為DC膜表面CD83、CD86、HLA-DR分子上調(diào)表達(dá),分泌IL-12增加,以及抗原攝取能力明顯下降。
[Abstract]:CD40 ligand CD40 ligand CD40L plays an important role in T cell dependent humoral and cellular immunity by interacting with its receptor CD40. In this study, the CD40L E107-L261) gene was cloned and fused with isoleucine zipperidin IZ at its N-terminal to promote the formation of trimer activity. Six Hiss were fused at the N-terminal of IZ, and the fused IZ-CD40L was cloned into pET30a expression vector and transformed into E. coli BL21DE3) expression system for induction expression. The results showed that the recombinant protein IZ-CD40L was expressed in E. coli BL21 in the form of inclusion body. IZ-CD40L recombinant protein with purity of more than 95% was obtained by denaturation, renaturation and affinity chromatography. The results of gel filtration chromatography and non-reductive SDS-PAGE showed that it was a trimer. The results of confocal laser scanning showed that the recombinant protein IZ-CD40L could bind to the CD40 molecules on the surface of multiple myeloma cell line XG2 and promote its aggregation on the membrane surface. The results of in vitro activity test showed that recombinant protein IZ-CD40L could effectively promote the maturation of Dentritic cells. The expression of HLA-DR on DC membrane was up-regulated, the secretion of IL-12 was increased, and the ability of antigen uptake was obviously decreased.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1977632