本文選題：人巨細(xì)胞病毒 + 先天性潛伏感染�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：目的 本研究在建立人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)先天性潛伏感染老年小鼠模型的基礎(chǔ)上,重點(diǎn)觀察了HCMV先天性潛伏感染引起小鼠大腦皮質(zhì)AD樣病理改變,探求HCMV先天性潛伏感染在AD發(fā)生中的可能作用,為AD病因?qū)W研究及發(fā)生機(jī)制提供新的思路和合適的動(dòng)物模型。 方法 從確定為HCMV先天性潛伏感染的小鼠及DMEM組小鼠中隨機(jī)各取6只,分別按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)處死小鼠,無菌取小鼠大腦組織。一部分用多聚甲醛固定,常規(guī)制作石蠟切片。一部分用戊二醛固定,制作電鏡標(biāo)本。其余腦組織做體外共培養(yǎng)激活實(shí)驗(yàn)。取石蠟切片用于以下試驗(yàn):(1)HE染色檢測(cè)小鼠腦組織構(gòu)筑、病理改變和生物學(xué)特性;(2)剛果紅染色檢測(cè)腦組織中的淀粉樣斑塊;(3)鍍銀染色檢查腦組織中的神經(jīng)原纖維纏結(jié)和淀粉樣斑塊;(4)間接免疫熒光檢測(cè)腦組織中的磷酸化Tau蛋白;(5)透射電鏡觀察小鼠大腦神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變;(6)體外共培養(yǎng)激活實(shí)驗(yàn)觀察:①HCMV特征性CPE ②PCR和RT-PCR分別檢測(cè)HCMV IE DNA和UL83 DNA及其相應(yīng)mRNA表達(dá)③間接免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞爬片中的HCMV IE和pp65蛋白 ④透射電鏡觀察細(xì)胞爬片中的皰疹樣病毒顆粒:(7)對(duì)大腦皮層的神經(jīng)元數(shù)目、神經(jīng)原纖維纏結(jié)數(shù)和突觸數(shù)密度進(jìn)行計(jì)數(shù)。 結(jié)果 HE染色發(fā)現(xiàn)病毒感染組小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元著色較淺,數(shù)目明顯減少,神經(jīng)元發(fā)生退行性病變;尤其是海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞脫失,數(shù)目減少,胞質(zhì)疏松,細(xì)胞層數(shù)減少。剛果紅染色發(fā)現(xiàn)病毒感染組小鼠大腦皮質(zhì)中有淀粉樣斑塊。鍍銀染色發(fā)現(xiàn)小鼠大腦皮質(zhì)中有神經(jīng)原纖維纏結(jié)和淀粉樣斑塊。間接免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)病毒感染組小鼠大腦皮質(zhì)中有磷酸化Tau蛋白沉積,呈團(tuán)塊狀分布。透射電鏡發(fā)現(xiàn)在小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯病理改變,雖未找到皰疹樣病毒顆粒,但在核內(nèi)發(fā)現(xiàn)雙股螺旋細(xì)絲、膜性環(huán)狀物和長(zhǎng)線形絲狀物。體外共培養(yǎng)激活后,
[Abstract]:Objective to establish an old mouse model of congenital latent infection of human cytomegalovirus (HCMV), and to observe the AD like pathological changes in cerebral cortex of mice caused by congenital latent infection of human cytomegalovirus (HCMV). To explore the possible role of congenital latent infection of HCMV in the pathogenesis of AD and to provide a new idea and a suitable animal model for the study of the etiology and pathogenesis of AD. Methods six mice in HCMV congenital latent infection group and six mice in DMEM group were randomly selected. According to the experimental design, the mice were killed and the cerebrum tissues of the mice were removed aseptically. Some of them were fixed with paraformaldehyde, and paraffin sections were made routinely. Part of the specimens were fixed with glutaraldehyde. The other brain tissues were cocultured and activated in vitro. The paraffin sections were used to detect the brain tissue architecture of mice by using the following test: 1. Pathological changes and biological characteristics) Detection of amyloid plaques in brain tissue by Congo red staining (Ag-plated staining) Detection of neurofibrillary tangles and amyloid plaques in brain tissue) indirect immunofluorescence detection of phosphorylation in brain tissue Observation of ultrastructural changes of mouse brain neurons by transmission electron microscope (Tau protein 5) in vitro co-culture activation experiment observation on the expression of HCMV IE DNA and UL83 DNA and their corresponding mRNA expression 3 indirect immunofluorescence in CPE 2PCR and RT-PCR, respectively The transmission electron microscopy of HCMV IE and pp65 protein 4 in the cell climbing tablets was used to observe the number of neurons in the cerebral cortex induced by Herpesvirus particles: 7). The number of neurofibrillary tangles and synaptic number density were counted. Results HE staining showed that the number of neurons in cerebral cortex of mice infected with virus was light, the number of neurons decreased and the number of neurons decreased, especially in hippocampal area, the number of neurons was decreased, the cytoplasm was loose and the number of cell layers was decreased. Congo red staining revealed amyloid plaques in the cerebral cortex of mice infected with virus. Silver plated staining revealed neurofibrillary tangles and amyloid plaques in the cerebral cortex of mice. Indirect immunofluorescence assay showed that phosphorylated Tau protein was deposited in the cerebral cortex of mice infected with virus and distributed as a mass. The ultrastructure of neurons in the cerebral cortex of mice was observed by transmission electron microscope. Although no herpes like virus particles were found in the nucleus, double helical filaments, membranous rings and long linear filaments were found in the nucleus. After in vitro co-culture activation,
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R361

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本文編號(hào)：1965134