本文選題：水通道蛋白1(AQP1) + 碘乙酰胺(IA)　； 參考：《中國(guó)醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 碘乙酰胺(IA)誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞水通道蛋白1(AQP1)的表達(dá) 前言 AQPs是最近發(fā)現(xiàn)的水通道家族。其中水通道蛋白AQP1是一種最先從紅細(xì)胞分離出來(lái)的28kDa蛋白，它在腎臟、肺、腦，和眼均有表達(dá)，其調(diào)節(jié)機(jī)制是復(fù)雜的。體外培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞自然表達(dá)AQP1，故本文以小鼠成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)碘乙酰胺模擬低氧，探討其在等滲和高滲不同狀態(tài)下AQP1表達(dá)的變化。 實(shí)驗(yàn)材料和方法 一、材料 1．小鼠成纖維細(xì)胞株(BALB／c 3T3) 2．碘乙酰胺(IA) 3．AQP1抗體 4．抗兔IgG 5．肌動(dòng)蛋白 6．胎牛血清 7．MEM培養(yǎng)基 8．山梨醇 二、方法 1．細(xì)胞培養(yǎng)和收集。 小鼠成纖維細(xì)胞用含有10％FBS的培養(yǎng)液，放于37℃，5％CO_2的孵箱中培養(yǎng)。另向培養(yǎng)液中加入山梨醇配成0.1M和0.4M的高滲培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)時(shí)，細(xì)胞分別用等滲和高滲培養(yǎng)液孵育，并向其中加入碘乙酰胺(30umol／L)，分別于0h，4h及6h收集細(xì)胞并凍結(jié)。用冰-細(xì)胞裂解液重懸浮細(xì)胞沉淀，形成一個(gè)凍融循環(huán)。細(xì)胞上清以BSA為標(biāo)準(zhǔn)，用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度。 2．SDS／PAGE and Western blotting。 細(xì)胞溶解產(chǎn)物進(jìn)行SDS／PAGE凝膠電泳，并且將免疫印記蛋白轉(zhuǎn)印到膜上。用化學(xué)發(fā)光和放射自顯影術(shù)增強(qiáng)免疫印記使之可見(jiàn)。用凝膠圖象分析系統(tǒng)測(cè)定相對(duì)密度。 3．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 測(cè)定每組通過(guò)放射自顯影術(shù)得到的蛋白免疫印記結(jié)果的密度，用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。對(duì)不同干涉用非配對(duì)t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1．細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 正常時(shí)，細(xì)胞主要呈梭形，多角狀，分裂相細(xì)胞呈類圓形，單層貼壁生長(zhǎng)。在給予IA 4小時(shí)細(xì)胞形態(tài)變圓，體積變大；6小時(shí)細(xì)胞核增大，細(xì)胞溶解壞死。 2．Western-blot免疫印記檢測(cè)結(jié)果 通過(guò)免疫印記定量測(cè)定，細(xì)胞等滲培養(yǎng)滴加IA(30umol／L)4小時(shí)，AQP1表達(dá)增加24.4％(n=6，P＞0.05)。6小時(shí)AQP1表達(dá)增加193.8％(n=6，P＜0.05)。 細(xì)胞0.1M高滲培養(yǎng)滴加IA(30umol／L)4小時(shí)AQP1表達(dá)增加84.7％(n=2，P＞0.05)，，6小時(shí)AQP1表達(dá)增加63.8％(n=2，P＞0.05)。 細(xì)胞0.4M高滲培養(yǎng)后AQP1處于高表達(dá)，滴加IA 4小時(shí)AQP1表達(dá)略有降低，為8.9％，6小時(shí)AQP1表達(dá)增加26.2％。 比較高滲培養(yǎng)和等滲培養(yǎng)，高滲培養(yǎng)滴加IA后AQP1表達(dá)峰值前提。 討論 研究表明，在有水通道蛋白表達(dá)的上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，其水滲透性也高；在接近出生時(shí)肺水通道蛋白的表達(dá)是增加的；AQP1敲除小鼠肺泡-毛細(xì)血管間水的滲透性水通透性較野生型降低；腎臟、體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細(xì)胞和在體小鼠高滲均誘導(dǎo)AQP1的表達(dá)。 我們的研究顯示由碘乙酰胺模擬缺氧，在等滲和高滲狀態(tài)下均可誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞APQ1的大量表達(dá)。我們推測(cè)缺氧條件下AQP1參與細(xì)胞水的轉(zhuǎn)運(yùn)。 結(jié)論 碘乙酰胺(IA)可誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞水通道蛋白1(AQP1)的大量表達(dá)，提示缺氧條件下AQP1參與細(xì)胞水的轉(zhuǎn)運(yùn)。
[Abstract]:Expression of Aquaporin - 1 ( AQP1 ) in Mice Induced by Iacetamide ( IA )






Foreword






AQPs is the most recently discovered family of water channels . Aquaporin AQP1 is the first 28 kDa protein isolated from red blood cells . Its regulatory mechanism is complex . AQP1 is naturally expressed in mouse fibroblasts in vitro .






experimental materials and methods






I . Materials






1 . Mouse fibroblast cell line ( BALB / c 3T3 )






2 . iodoacetamide ( IA )






3 . AQP1 antibody






4 . Anti - rabbit IgG






5 . actin






6 . Fetal Bovine Serum






7 . MEM Medium






8 . Sorbitan






II . Methodology






1 . Cell culture and collection .






Mouse fibroblasts were cultured in a culture medium containing 10 % FBS , incubated in incubator at 37 鈩

本文編號(hào)：1963364