本文選題：血小板 + 噬菌體展示��； 參考：《臨床輸血與檢驗》2006年01期

【摘要】：目的運用噬菌體抗體庫技術(shù)構(gòu)建一個經(jīng)血小板自身免疫的抗體組合文庫。方法從3例慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)患者的外周血中分離淋巴細胞,提取總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,通過半巢式PCR擴增抗體輕鏈κ鏈基因和重鏈Fd段基因,并依次克隆到載體pComb3中構(gòu)建人源噬菌體Fab抗體庫。結(jié)果20次電轉(zhuǎn)后得到庫容約為2.3×106cfu的人源噬菌體Fab抗體庫。用多聚甲醛固定的血小板細胞作為抗原,通過3輪親和選擇,ELISA鑒定結(jié)合活性較高者,選取3個經(jīng)測序分析后顯示抗體輕鏈和重鏈Fd段在核苷酸和氨基酸水平都符合人免疫球蛋白基因結(jié)構(gòu)特征。結(jié)論成功構(gòu)建了抗血小板人源噬菌體抗體庫,可用于進一步篩選針對血小板特異性靶點如GPIIb/IIIa等的人源抗體,進行以GPIIb/IIIa受體等作為靶點的治療性人源抗體的研究和開發(fā)。
[Abstract]:Objective to construct a platelet autoimmune antibody library using phage antibody library. Methods lymphocytes were isolated from peripheral blood of three patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP). Total RNAs were extracted and synthesized by reverse transcription. The light chain 魏 chain gene and heavy chain FD gene were amplified by semi-nested PCR. The human phage Fab antibody library was constructed by cloning into the vector pComb3 in turn. Results the human phage Fab antibody library containing about 2.3 脳 106cfu was obtained after 20 times of electroporation. Platelet cells fixed with paraformaldehyde were used as antigens, and three rounds of affinity selection were used to identify those with high binding activity. The sequence analysis showed that the Fd fragment of light chain and heavy chain of antibody were in accordance with the structural characteristics of human immunoglobulin gene at the level of nucleotide and amino acid. Conclusion the anti-platelet human phage antibody library was successfully constructed, which can be used to screen human antibodies against platelet-specific targets such as GPIIb/IIIa, and to study and develop therapeutic human antibodies targeting GPIIb/IIIa receptors.
【作者單位】：
【分類號】：Q789

【共引文獻】

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本文編號：1949979