本文選題：阻塞性黃疸 + 細胞免疫��； 參考：《華中科技大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】： 阻塞性黃疸的病人在圍手術(shù)期中，易伴發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，并可能發(fā)展為膿毒血癥，多器官功能障礙綜合癥(MODS)。新的資料表明死亡率仍在15—20％，大多研究表明：阻塞性黃疸宿主存在著免疫功能障礙，特別是細胞免疫功能障礙，如：肝臟枯否細胞(Kupffer cells)吞噬和清除細菌能力下降；阻塞性黃疸患者皮膚遲發(fā)性過敏反應(yīng)低下，血白細胞介素2(IL-2)水平下降，T細胞介導(dǎo)的免疫功能受抑制。盡管一直以來人們對阻塞性黃疸宿主免疫狀態(tài)進行了大量基礎(chǔ)和臨床過研究，但膽汁淤積導(dǎo)致宿主免疫受損的機制仍不清楚。主要觀點有兩種：(1)膽汁淤積(如膽鹽)直接造成肝細胞和免疫細胞如T淋巴細胞結(jié)構(gòu)和功能的缺陷；(2)膽汁淤積時宿主血液中存在免疫抑制因子，并推測膽酸、膽紅素、α球蛋白及內(nèi)毒素起這種體液因子的作用。但它們通過何種機制影響阻塞性黃疸宿主的細胞免疫狀態(tài)仍不清楚。近年來，人們發(fā)現(xiàn)，細胞免疫功能中Th_1／Th_2細胞平衡起十分重要的作用，輔助性T細胞(Th)根據(jù)CD4_4~+T細胞分泌的兩類不同細胞因子分為Th_1和Th_2細胞，Th_1細胞主要分泌IL-2、ILN-r等，主要介導(dǎo)與細胞免疫有關(guān)的免疫應(yīng)答；Th_2細胞主要分泌IL-10、IL-6、IL-4等，主要參與體液免疫。較多的研究證明，阻塞性黃疸宿主血IL-2水平下降，也有部分實驗表明，膽總管結(jié)扎(BDL)大鼠早期IL-10、IL-6就明顯上升，表明阻塞性黃疸宿主存在Th_1／Th_2細胞失衡。IL-2能促進活化T淋巴細胞增殖，促進自然殺傷(NK)細胞活性等，在細胞免疫中起到了非常重要的作用；IL-10是重要的抗炎細胞因子，可抑制IL-2的分泌，誘導(dǎo)前體細胞向Th_2細胞轉(zhuǎn)化，進而抑制T細胞增殖；前列腺素E_2(PGE_2)是重要的炎癥介質(zhì)，也是一種免疫調(diào)變劑，具有抑制淋巴細胞生成IL-2的作用，近年基礎(chǔ)研究表明它也可調(diào)控IL-10表達。許多資料證實，阻塞性黃疸宿主存在花生四烯酸代謝紊亂，前列腺素合成代償性增加。由上述可見機體免疫功能的正常運轉(zhuǎn)，有賴于通過免疫細胞間種類繁多，作用復(fù)雜的炎性介質(zhì)、細胞因子的信使作用，達到免疫細胞間(Th_1／Th_2)的平衡協(xié)同。而PE_2、IL-10、IL-2是其中的重要成分，但阻塞性黃疸宿主PGE_2與IL-10及IL-2的相關(guān)研究尚未見報道。本課題研究阻塞性黃疸宿主血漿PE_2水平，血淋巴細胞IL-10、IL-2產(chǎn)生能力的動態(tài)變化及相關(guān)關(guān)系，探討阻塞性黃疸宿主免疫受損的機理，并進一步在臨床上觀察免疫調(diào)變劑消炎痛、當歸對阻塞性黃疸患者細胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用，希望為臨床治療提供新的途徑。 本課題通過動物及臨床兩方面，分三部分進行研究： 第一部分阻塞性黃疸后前列腺素E_2與淋巴細胞IL-10、IL-2活性的相關(guān)性分析 一、目的 探討阻塞性黃疸大鼠血漿PE_2和血淋巴細胞IL-10、IL-2水平的動態(tài)變化及相關(guān)關(guān)系，為阻塞性黃疸的臨床治療提供理論依據(jù)。 二、材料和方法 (一)材料和分組 1、選SD大鼠70只分組，雌雄各半，體重180-240克。隨機分為正常對照組10只，BDL后一周、二周、三周各20只。 2、PE_2放免分析藥盒(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)所)，IL-10、IL-2試劑盒(Sigma，USA)。 (二)方法 1、模型制作：實驗組行膽總管雙重結(jié)扎并剪斷，對照組只游離膽總管，不予結(jié)扎。 2、取腹腔靜脈血提取PGE_2，用放免法測試。 3、取腹腔靜脈血分離出淋巴細胞，培養(yǎng)制備IL-10、IL-2，采用ELISA法監(jiān)測其活性單位。 4、大鼠胸腺行HE染色，光鏡下觀察，取胸腺組織制細胞懸液于光鏡下計數(shù)。 5、統(tǒng)計學(xué)處理：實驗結(jié)果以(?)±S表示，各均數(shù)間用t檢驗。將來自相同個體的PGE_2和IL-10、IL-2值用直線相關(guān)法進行相關(guān)分析。 三、結(jié)果 1、胸腺組織學(xué)改變BDL后大鼠胸腺重量減輕，淋巴細胞數(shù)減少，三周時有顯著變化(表1)；組織學(xué)可見細胞稀疏，胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)區(qū)縮小，邊界模糊。 2、血漿PGE_2和血淋巴細胞IL-10、IL-2產(chǎn)生能力的變化 大鼠血漿PGE_2和血淋巴細胞IL-10水平在BDL后1，2周時都有明顯升高，與對照組相比及1、2周間相比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，第三周時仍維持在較高水平，但與1、2周相比，差異無顯著意義(P＞0.05)；相關(guān)分析表明：IL-10水平與血漿PGE_2的升高呈顯著正相關(guān)，，r=0.878，P＜0.01；IL-2水平在BDL后1、2周時都有下降趨勢，但變化無顯著意義(P＞0.05)，第三周，IL-2水平則有明顯下降，與對照組及1、2周組相比，差異都有顯著意義(P＜0.05，見表2)；相關(guān)分析表明：IL-2水平與血漿PGE_2的升高呈顯著相關(guān)，r=0.645。P＜0.05。 四、結(jié)論 阻塞性黃疸大鼠存在細胞免疫功能受損的免疫功能失衡，且可能與血漿PGE_2的升高有關(guān)，為下一步應(yīng)用環(huán)氧脂酶抑制劑(如消炎痛)減少PGE_2產(chǎn)生，改善細胞免疫狀態(tài)提供了理論基礎(chǔ)。 第二部分消炎痛對阻塞性黃疸患者外周血淋巴細胞IL-10、IL-2活性的影響 一、目的 研究阻塞性黃疸患者外周血淋巴細胞IL-10、IL-2活性和血漿前列腺素E_2水平的變化，同時觀察消炎痛對上述指標的影響。 二、臨床資料和方法 (一)臨床資料 阻塞性黃疸患者16例，男性10例，女性6例，平均年齡52.4歲，另取10例健康成人作為正常對照。 (二)方法 1、分別于用藥前和用藥后7天(口服消炎痛25mg，3／日)，抽血進行各項檢測，另取10例年齡、性別相近的健康者作為正常對照。PGE_2、IL-10、IL-2的制備與檢測同論文一。 2、統(tǒng)計學(xué)處理：實驗結(jié)果以(?)±S表示，各均數(shù)間用t檢驗。將來自相同個體的PGE_2和IL-10、IL-2值用直線相關(guān)法進行相關(guān)分析。 三、結(jié)果 1、阻塞性黃疸患者血漿中PGE_2水平與淋巴細胞工L-10、IL-2活性： 與正常對照相比，阻塞性黃疸患者血漿中PGE_2水平及外周血淋巴細胞IL-10活性明顯升高，而血淋巴細胞IL-2活性明顯下降，P＜0.01。 2、用藥后患者血漿中PGE_2水平與工L-10、IL-2活性的變化： 對阻塞性黃疸患者進行為期7天的消炎痛治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其血淋巴細胞IL-2活性明顯升高，而IL-10活性及血漿中PGE_2水平明顯下降，與用藥前相比差異有顯著性，P＜0.05，見表3；且血淋巴細胞工L-10、IL-2的變化與血漿PGE_2水平顯著相關(guān)(r_(IL-10)=0.868，P＜0.05，r_(IL-2)=-0.586，P＜0.05)。 表3：消炎痛對阻黃疸患者IL-10、IL-2活性的影響((?)±s) △與正常對照相比P＜0.01；*與用藥前相比P＜0.05 四、結(jié)論 本研究表明，阻塞性黃疸病人存在著細胞免疫功能受損的免疫功能障礙，消炎痛能夠明顯改善阻塞性黃疸患者的細胞免疫功能狀態(tài)，有可能成為臨床上降低阻塞性黃疸患者易感性有價值的藥物之一。 第三部分當歸對阻塞性黃疸患者淋巴細胞IL-2活性和IL-2R表達的影響 一、目的 通過觀察外周血淋巴細胞IL-2活性及IL-2R表達的變化，探討圍手術(shù)期當歸對阻塞性黃疸患者細胞免疫調(diào)節(jié)作用，旨在為臨床治療尋求有效且副作用小的治療方法。 二、臨床資料和方法 (一)臨床資料 阻塞性黃疸患者14例，男性10例，女性4例，平均年齡48歲，另取10例健康成人作為正常對照。 (二)方法 1、治療組：我們用當歸注射液(8mg/kg/d，靜滴)圍手術(shù)期對患者治療14天，術(shù)前10天，術(shù)后繼續(xù)用4天。 2、分別于用藥前、術(shù)前和術(shù)后第4天抽血，用ELISA及免疫熒光法檢測IL-2活性及IL-2R的表達。 3、統(tǒng)計學(xué)處理：實驗結(jié)果以(?)±S表示，各均數(shù)間用t檢驗。 三、結(jié)果 阻塞性黃疸患者外周血淋巴細胞IL-2的活性及IL-2R表達與正常人相比均明顯下降(P＜0.01)。給予阻塞性黃疸患者為期14天的圍手術(shù)期當歸注射治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)術(shù)前其工L-2活性及IL-2R表達均明顯升高，與用藥前相比有顯著性差異(P＜0.01)。術(shù)后其IL-2活性IL-2R表達雖略有下降，但與術(shù)前相比無顯著性差異。與用藥前相比仍有明顯升高(P＜0.01)(見表4)。 表4：當歸對阻塞性黃疸患者圍手術(shù)期的免疫調(diào)節(jié)作用((?)±S) 注：(1)與正常對照組比P＜0.01；(2)與用藥前比P＜0.01 四、結(jié)論： 表明當歸具有改善阻塞性黃疸患者圍手術(shù)其免疫功能的臨床實用價值。 總結(jié) 一、本課題動物實驗結(jié)果表明：阻塞性黃疸大鼠存在細胞免疫功能受抑制，且可能與血漿PG E_2的升高有關(guān)。阻塞性黃疸時，膽汁淤積、內(nèi)毒素血癥都可使患者體內(nèi)PG E_2產(chǎn)生和釋放增加，影響淋巴細胞因子的產(chǎn)生，改變Th_1／Th_2細胞平衡，使阻塞性黃疸患者的細胞免疫功能受抑制。為下一步應(yīng)用環(huán)氧脂酶抑制劑(如消炎痛)減少POE_2產(chǎn)生，改善細胞免疫狀態(tài)提供了理論基礎(chǔ)。 二、本研究表明，阻塞性黃疸病人存在著細胞免疫功能受損的免疫功能障礙，消炎痛能夠明顯改善阻塞性黃疸患者的細胞免疫功能狀態(tài)，有可能成為臨床上降低阻塞性黃疸患者易感性有價值的藥物之一。但前列腺素是一組花生四烯酸代謝產(chǎn)物，種類繁多，作用復(fù)雜。如其中前列環(huán)素(PGI_2)對維持阻塞性黃疸時的腎血流量、腎小球濾過率，減少肝腎綜合癥的發(fā)生起重要作用。還需對前列腺素及其它炎性介質(zhì)、細胞因子在阻塞性黃疸時發(fā)生的病理改變以及它們之間的相互關(guān)系進行深入研究。非固醇類抗炎藥抑制PG產(chǎn)生，作用廣泛，則可能產(chǎn)生相應(yīng)的副作用。需要進一步研究，尋求有效且副作用小的治療方法。三、我們臨床研究表明，當歸能夠明顯改善阻塞性黃疸患者淋巴細胞IL-2的活性及IL-2R表達，具有改善阻塞性黃疸患者圍手術(shù)期細胞免疫功能的臨床實用價值。阻塞性黃疸宿主細胞免疫受損的原因及機理十分復(fù)雜，可能是多因素、多途徑，有賴于進一步的基礎(chǔ)和臨床研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R657.4;R392

【參考文獻】

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本文編號：1946361