發(fā)布時(shí)間：2018-05-27 05:40

  本文選題：結(jié)核分枝桿菌 + Rv1494　； 參考：《四川大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的一種古老的傳染病，目前仍是世界上引起死亡的最主要的疾病之一。目前，全球大約有1／3的人口有潛伏期結(jié)核分枝桿菌的感染，而大部分新的結(jié)核病例是由潛伏期的結(jié)核分枝桿菌的活化引起的。雖然結(jié)核病的化療方案在結(jié)核病的控制中起了很大作用，但其主要對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病起作用，對(duì)潛伏期的結(jié)核分枝桿菌的感染則作用不大。因此，了解MTB持留的機(jī)制，研究其持留相關(guān)基因，，將對(duì)結(jié)核病的治療意義重大。 研究結(jié)果提示，很多不同種屬的病原菌都具有形成潛在感染的能力，可能與原核生物染色體基因組上保守的TA系統(tǒng)有關(guān)，其主要由毒素和抗毒素位點(diǎn)組成，被認(rèn)為是原核生物基因表達(dá)的質(zhì)量控制系統(tǒng)。該系統(tǒng)包括7個(gè)兩組分基因家族(ccd、re1BE、parDE、higBA、mazEF、phd／doc、vapBC)和1個(gè)三組分家族(ω—ε—ξ)，這些家族間蛋白序列表現(xiàn)出較高的相似性，并且有各自的模塊。Gerdes等通過生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn)在結(jié)核桿菌H37Rv株中含有38個(gè)TA loci，其中包括9個(gè)mazEF位點(diǎn)。為研究TA家族與結(jié)核桿菌潛伏感染之間的關(guān)系，我們選取了其中的一組可能的mazEF位點(diǎn)Rv1494和Rv1495。經(jīng)過生物信息學(xué)分析，Rv1494和Rv1495基因表達(dá)的蛋白所具有的模塊與TA家族中的常見模塊一致。我們首先從基因組中擴(kuò)增出這兩個(gè)基因片段，并在原核融合表達(dá)載體pET32a(+)中成功表達(dá)了相應(yīng)的融合蛋白。同時(shí)我們還克隆了Rv1494-Rv1495融合基因，并將其重組到穿梭表達(dá)載體pMV261中，經(jīng)電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入無毒的恥垢分枝桿菌(mc~2155)中，并在重組恥垢分枝桿菌(Rmc~2155)中成功表達(dá)了11KD的Rv1494-Rv1495編碼蛋白。本研究還對(duì)負(fù)載空質(zhì)粒pMV261的恥垢分枝桿菌及負(fù)載重組質(zhì)粒的恥垢分枝桿菌在生長曲線、酸壓力及熱壓力方面作了比較。 綜上所述，本研究首次對(duì)結(jié)核分枝桿菌Rv1494和Rv1495基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)，同時(shí)構(gòu)建了重組的穿梭質(zhì)粒pMV261-(Rv1494-Rv1495)，并將其轉(zhuǎn)化入恥垢分枝桿菌中，對(duì)重組恥垢分枝桿菌MCEF功能進(jìn)行了初步的研究。結(jié)果提示，Rv1494-Rv1495可能對(duì)結(jié)核桿菌在抵抗外界壓力以維持其潛伏感染中有一定作用。
[Abstract]:Tuberculosis (TB) is an ancient infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosisus MTB (Mycobacterium tuberculosis), and it is still one of the leading causes of death in the world. At present, about a third of the world's population has a latent mycobacterium tuberculosis infection, and most of the new cases of tuberculosis are caused by the activation of the latent mycobacterium tuberculosis. Although the chemotherapy regimen of tuberculosis plays a great role in the control of tuberculosis, it plays an important role in active tuberculosis, but it has little effect on the infection of Mycobacterium tuberculosis in latent period. Therefore, understanding the mechanism of MTB retention and studying its retention related genes will be of great significance in the treatment of tuberculosis. The results suggest that many pathogens of different species have the ability to form potential infections, which may be related to the conserved TA system on the chromosomal genome of prokaryotes, which is mainly composed of toxin and antitoxin sites. It is considered to be a quality control system for gene expression in prokaryotes. The system consists of seven two-component gene families, the two component gene family, the BCCfamily of two components, the protein sequence of these families shows high similarity, and one family of three components (蠅-蔚-尉), which shows high similarity in the protein sequence between the two families, and the protein sequence of the two families is similar to that of the protein family. By bioinformatics method, 38 TA locions were found in Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain, including 9 mazEF loci. To study the relationship between TA family and latent infection of Mycobacterium tuberculosis, we selected one of the possible mazEF loci Rv1494 and Rv1495. Bioinformatics analysis showed that the proteins expressed in Rv1494 and Rv1495 genes had the same modules as those in the TA family. We first amplified the two fragments from the genome and successfully expressed the fusion protein in the prokaryotic fusion expression vector pET32a (). At the same time, we cloned the Rv1494-Rv1495 fusion gene, and recombined it into the shuttle expression vector pMV261, and then transformed it into the nontoxic Mycobacterium smearicum mcc2155), and successfully expressed the Rv1494-Rv1495 coding protein of 11KD in the recombinant Mycobacterium smearicum Rmcn2155). The growth curve, acid pressure and thermal pressure of Mycobacterium pubescens loaded with empty plasmid pMV261 and recombined plasmid were compared. In conclusion, the Rv1494 and Rv1495 genes of Mycobacterium tuberculosis were cloned and expressed for the first time, and the recombinant shuttle plasmid pMV261-nrv1494-Rv1495 was constructed and transformed into Mycobacterium smeareus. The MCEF function of recombinant Mycobacterium smegmatis was preliminarily studied. The results suggest that Rv1494-Rv1495 may play a role in resisting external pressure and maintaining latent infection of Mycobacterium tuberculosis.
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：1940696